[发明专利]杂交瘤细胞株及其分泌的抗利他林单克隆抗体和应用

说明书

本发明公开杂交瘤细胞株及其分泌的抗利他林单克隆抗体和应用。一种分泌抗利他林的杂交瘤细胞株3G12.7，保藏编号为CCTCC No.C202069；抗利他林单克隆抗体，由上述杂交瘤细胞株3G12.7或其传代细胞株分泌产生。该抗体为IgG1型,轻链为kappa型。上述抗利他林单克隆抗体用于制备利他林检测试剂盒中的应用或用于制备检测利他林的胶体金免疫诊断试纸条中的应用。本发明抗利他林单克隆抗体效价高，特异性强，可用于对利他林进行快速、准确的免疫检测和免疫分析。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株及其分泌的抗利他林单克隆抗体和应用。

背景技术

利他林，即盐酸哌甲酯片，是一种中枢神经兴奋药物，主要用于治疗注意缺陷多动障碍(即儿童多动综合征)、发作性睡病，以及巴比妥类、水合氯醛等中枢抑制药过量引起的昏迷，也有人尝试用于小儿遗尿。对于儿童注意力缺陷及多动症，利他林可减轻多动症状，提高注意力，让孩子的精神集中，一定程度上提高学习能力。但是，长期服用利他林具有成瘾性，属于国家严格管制的一类精神药品，因此只能在医院凭医生的处方调配，并根据患者的病理生理情况和疗程限量供应。

滥用利他林的危害很大。利他林能广泛兴奋大脑皮层，因此其不良反应多见，主要包括失眠(中枢兴奋作用引起)、头晕、头痛(可能是血压升高引起)、恶心、厌食、心跳加快等。此外，长期应用利他林可产生药物依赖。曾有研究报道，利他林可抑制儿童的生长发育，因此建议6岁以下儿童应避免使用。利他林中毒症状包括焦虑、紧张、精神错乱、谵妄、幻觉等精神症状，严重者可出现昏迷、惊厥甚至死亡。

即使是在临床上，以治疗为目的使用利他林都特别谨慎。一般通过剂量滴定的方法确定用药剂量，医生通过观察患者对治疗的耐受情况，以及治疗效果来确定给药剂量和疗程。患者要在早餐或午餐前服用药物，傍晚后不宜服药，以免引起失眠。癫痫儿童应避免使用，以免诱发癫痫。服用单胺氧化酶抑制剂(如抗结核药物异烟肼)的患者应禁用利他林，以免引起严重高血压。

利他林对于轻微脑功能紊乱的患儿有效，能促使患儿增强自我控制能力，集中注意力，减少小动作，增加学习兴趣，从而提高学习成绩。但是对于未患病的普通儿童，利他林提高其注意力的作用极其有限，而且还会发生毒副反应，因此通过服用利他林来提高学习成绩，几乎不可能。考试期间，学生精神压力大、神经紧张，如果此时服用利他林等中枢兴奋药物，可能导致考生兴奋过度，甚至发生狂躁。

口服利他林后，约80％的剂量会在24小时内通过尿液排出体外，其中约60％转化为利他林酸。2008年国际反兴奋剂机构已将利他林列为特定刺激剂，禁止选手在比赛中使用。

通过杂交瘤技术可以制备抗利他林杂交瘤细胞株。通过此杂交瘤细胞株纸制备出的抗体能用于制备胶体金免疫诊断试纸条，实现了在现场对人员快速检测的要求。

发明内容

本发明的第一个目的是提供了一种分泌抗利他林单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株能产生高效价的抗利他林单克隆抗体。

一种分泌抗利他林的杂交瘤细胞株，命名为杂交瘤细胞株3G12.7，已于2020年6月3日保藏于中国典型培养物保藏中心(China Center for Type Culture Collection，简称CCTCC)，保藏编号为CCTCC No.C202069；中国典型培养物保藏中心的地址为：湖北省武汉市武昌区武汉大学保藏中心(武汉大学第一附属小学对面)。

本发明采用小剂量肌肉注射免疫方法和尾静脉免疫相结合的方法，用利他林注射小鼠，获得免疫的小鼠脾细胞，进而将免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合，用利他林进行筛选，从而获得所述杂交瘤细胞株。

利他林本身的分子量太小，其不具有免疫原性，即缺乏T细胞表位而无法直接诱导动物机体产生特异性抗体，因此本发明对利他林进行化学修饰，偶联BGG(牛血清丙种球蛋白)获得能诱导B细胞的增殖和分化继而产生特异性抗体的人工抗原(MPD-BGG)。所述的利他林分子结构式(I)所示：