[发明专利]一种利用胶体金法联合检测心肌标志物的试剂盒及其制备方法、应用

说明书

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种利用胶体金法联合检测心肌标志物的试剂盒及其制备方法、应用。该试剂盒包括检测卡，所述检测卡含有CK‑MB、cTnI及MYO检测试纸条各一条；所述检测试纸条是由吸水纸、硝酸纤维素膜、样品垫、胶金垫、PVC板和塑料卡组成；在硝酸纤维素膜C线包被羊抗鼠IgG抗体，T线分别包被鼠抗CK‑MB、鼠抗cTnI、鼠抗MYO单克隆抗体；在胶金垫上喷有胶体金标记的相应的鼠抗CK‑MB、鼠抗cTnI、鼠抗MYO单克隆抗体。本发明制备的试剂盒能够显著提高检测灵敏度，通过将抗体进行预处理，捕获能力增强，减少漏诊及误诊率；检测时间短，且对检测环境要求低，特异性及稳定性好。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种利用胶体金法联合检测心肌标志物的试剂盒及其制备方法、应用。

背景技术

心血管疾病是危害人类健康及生命的严重疾病，而急性心肌梗死是最常见、最危险的影响人类健康的头号杀手。心肌肌钙蛋白是心肌肌肉收缩的调节蛋白，有三种不同基因的亚基组成，而常用于实验室诊断的是cTnT和cTnI，cTnI由于其高度的心肌特异性，对于心肌损伤的高度敏感性及较长的窗口期，已被临床及检验人员管饭接受，成为了诊断急性心梗的金标准，且成为判断冠脉综合征病人处于心肌损伤风险的最合适标志物；肌酸激酶同工酶，简称CK-MB，主要存在于心肌内，CK-MB是诊断心肌受损比较有价值生化指标。当心肌损伤后，CK-MB释放到血液中，3-8h后开始升高，可持续3-5天。肌红蛋白MYO是一种小分子色素蛋白，有珠蛋白与正铁血红素结合而成，可与氧成可逆性结合，在肌细胞内有转运和贮存氧的作用，在心肌受损时即从心肌细胞中弥散出来进入血液循环，肌红蛋白只存在于心肌及横纹肌内，其他组织包括平滑肌内都不含有此种蛋白。

早诊断、早治疗是挽救急性心肌梗死患者生命的关键。患者临床症状有时并不典型，心电图也有可能呈非特异性改变，因此心肌标志物的检测成为早期诊断的重要依据。目前，临床上常通过检测特异性标志物来进行对急性心肌梗死的早期诊断，包括。胶体金免疫层析法检测心肌标志物时具有良好的特异性、敏感性，但是，统计发现，仍具有较高程度的误诊率及漏诊率。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种利用胶体金法联合检测心肌标志物的试剂盒。

本发明还提供了一种上述试剂盒的制备方法。

本发明还提供了一种上述试剂盒的应用。

本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：

本发明提供了一种利用胶体金法联合检测心肌标志物的试剂盒，包括检测卡，所述检测卡含有CK-MB、cTnI及MYO检测试纸条各一条；所述检测试纸条是由吸水纸、硝酸纤维素膜、样品垫、胶金垫、PVC板和塑料卡组成；在硝酸纤维素膜C线包被羊抗鼠IgG抗体，T线分别包被鼠抗CK-MB、鼠抗cTnI、鼠抗MYO单克隆抗体；在胶金垫上喷有胶体金标记的相应的鼠抗CK-MB、鼠抗cTnI、鼠抗MYO单克隆抗体。进一步的，所述鼠抗CK-MB、鼠抗cTnI、鼠抗MYO单克隆抗体具体操作过程为：将钛酸正丁酯溶液中逐滴加入氨水，滴加结束后，离心后将沉淀二氧化钛采用乙醇、去离子水洗涤，然后将沉淀加入聚谷氨酸、壳聚糖，加入鼠抗CK-MB、鼠抗cTnI、鼠抗MYO单克隆抗体溶液，搅拌均匀后即得。

上述钛酸正丁酯和氨水的体积比为1：1.5；所述氨水的体积分数为28%；所述聚谷氨酸、壳聚糖和二氧化钛的质量比为0.1：0.05：2。

进一步的，所述鼠抗CK-MB、鼠抗cTnI、鼠抗MYO单克隆抗体溶液和钛酸正丁酯的体积比为1：0.2。

本发明还提供了一种上述试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

（1）将聚酯膜在室温下浸泡在胶体金溶液中1-2h，烘干后裁剪成30cm×0.7cm的长条，喷涂胶体金标记物工作液，喷量为2.0-2.5μL/cm，使胶体金标记物工作液均匀喷到已处理聚酯膜上，然后干燥；