[发明专利]一种用于鉴定非洲芒果实蝇的LAMP引物组及其鉴定方法

说明书

本发明公开了一种用于鉴定非洲芒果实蝇的LAMP引物组及其鉴定方法。所述LAMP引物组由引物1‑引物4组成；所述引物1为序列表中序列1所示的单链DNA分子；所述引物2为序列表中序列2所示的单链DNA分子；所述引物3为序列表中序列3所示的单链DNA分子；所述引物4为序列表中序列4所示的单链DNA分子。本发明的LAMP引物组特异性好、检测时间短，对不同种群的非洲芒果实蝇均能有效检测，且检测方法具有不依赖贵重仪器、准确、快速、适用范围广等优点，对非洲芒果实蝇快速检测具有指导意义，为非洲芒果实蝇快速检测提供了有力的工具。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于鉴定非洲芒果实蝇的LAMP引物组及其鉴定方法。

背景技术

实蝇属双翅目实蝇科，在全世界广泛分布，约有500属4,500种，其中具有经济意义的实蝇有26属223种。实蝇的寄主范围广泛，在为害水果、蔬菜等经济作物的同时，也严重影响果蔬的对外贸易，造成贸易壁垒，导致巨大的经济损失。非洲芒果实蝇Ceratitis(Ceratalaspis)cosyra(Walker)隶属于双翅目(Diptera)实蝇科(Tephritidae)蜡实蝇属(Ceratitis Macleay)。该虫寄主广泛，主要危害芒果植物。亦能危害芒果、番石榴、酸橙、鳄梨、马诺拉李、野生番荔枝、桃。目前非洲芒果实蝇仅分布于非洲，包括安哥拉、贝宁、博茨瓦纳、布基纳法索、喀麦隆、中非共和国、刚果民主共和国、科特迪瓦、几内亚、肯尼亚、马达加斯加、马拉维、马里、莫桑比克、尼日利亚、塞内加尔、塞拉利昂、南非、苏丹、坦桑尼亚、多哥、赞比亚、津巴布韦。但基于CLMEX地点比较模型与ArcGIS插值分析相结合的方法预测表明，非洲芒果实蝇在全球的适生范围贯穿热带和亚热带的大部分地区，其中非洲中部、加勒比海区域、南美中部及北部、以及亚洲南部等区域为高度适生区。

随着世界贸易的频繁性，非洲芒果实蝇进入我国的可能性极大。非洲芒果实蝇一旦成功入侵到我国，将对我国的果蔬生产，尤其是芒果产业，带来消极的影响，其检疫鉴定特别是快速鉴定的需求愈发迫切。传统的实蝇鉴定工作主要依靠形态学特征，但实蝇种类多，区分不同实蝇种类之间的形态学差别往往非常细微和复杂，这些问题的存在都给实蝇传统形态鉴定带来了极大的阻碍。利用分子生物学技术进行实蝇种类鉴定，主要包括DNA条形码技术、PCR技术、限制性片段长度多态性技术以及基因芯片技术，但需昂贵的仪器设备，鉴定成本高，不适于在基层部门中推广应用。

环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)针对靶基因上的6个特异区域设计4-6条特殊引物，采用具有强链置换活性的Bst DNA聚合酶，在恒温条件下(60-65℃)反应约30-60min，即可完成核酸的大量扩增，产生大量不同长度的茎环结构DNA片段。LAMP是一种简便高效的核酸恒温扩增技术，可以在短时间内大量扩增反应产物，快速高效、灵敏度高，且操作简便，无需特殊仪器，检测结果可通过显色反应肉眼观察判断，更具应用推广前景。

发明内容

本发明的目的是提供用于检测非洲芒果实蝇的LAMP引物组、试剂盒及其应用。

第一方面，本发明保护用于检测或辅助检测非洲芒果实蝇的成套引物组。

本发明提供的用于检测或辅助检测非洲芒果实蝇的成套引物组由引物1-引物4组成；

所述引物1为如下a1)或a2)：

a1)序列表中序列1所示的单链DNA分子；

a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的单链DNA分子；

所述引物2为如下a3)或a4)：

a3)序列表中序列2所示的单链DNA分子；

a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的单链DNA分子；