[发明专利]一种虾青素纳米微囊的制备方法

权利要求书

1.一种虾青素纳米微囊的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)雨生红球藻中虾青素酯的提取

将雨生红球藻粉以液料比1：50～200溶于乙酸乙酯与乙醇的混合提取剂中，温度30～70℃，在水浴超声中浸提40～80min，8000～12000rpm离心3～5min取上清，混合上清液，避光于3～5℃保存；其中，所述乙酸乙酯与乙醇的体积比为1～6：1～6；

(2)解脂亚罗酵母发酵产碱性脂肪酶

将解脂亚罗酵母于28～32℃在PDA固体培养基上活化，挑取平板上的单菌落接种到含有1～3ml种子培养基的试管中，于25～32℃、120～200rpm摇床培养1～3d后，全部转接到装有50ml种子培养基的锥形瓶中，相同条件下摇床培养1～3d后，以接种量10～20％接种到发酵培养基中，相同条件下摇床培养，当酶活达到60～90U/L不再上升时，收集发酵液，7000～12000rpm，4℃，离心5～15min，取上清，3～5℃保存，得到脂肪酶液；

(3)碱性脂肪酶水解虾青素酯

取步骤(1)的上清液旋转蒸干，加入1～3倍质量的吐温80乳化，再将乳化液溶于0.05～0.2M、pH6～9的PBS缓冲溶液中，定容至10ml，以每微克总类胡萝卜素加入4～16U脂肪酶的量加入脂肪酶液，30℃，150～180rpm反应4～12h；反应结束后，加入与等体积的丙酮，室温条件下用漩涡振荡器300～500rpm振荡30～60s，再加入等体积的正己烷，上述同样方法振荡30～60s后，8000～15000rpm离心1～3min，离心后的混合溶液分层，移出上相液体，吹干，得到虾青素；

(4)植物乳杆菌细胞膜的提取

将植物乳杆菌细胞，经冻融处理使细胞破碎，于3000～5000rpm离心5～15min，并用0.01mol/L、pH7.4的PBS缓冲溶液洗涤，再按照植物乳杆菌细胞与2.5mM的PBS低渗溶液的质量比为1:30～50的比例，冰浴混悬15～25min后，于12000～18000rpm离心50～80min，弃上清，获得植物乳杆菌细胞膜溶液，在0.01mol/L、pH7.4的PBS缓冲溶液置3～5℃保存备用；

(5)虾青素纳米微囊的制备

将步骤(3)得到的虾青素加入1～3倍质量的吐温80研磨乳化，再将乳化液溶于0.05～0.2M、pH6～9的PBS缓冲溶液中，得到虾青素溶液；再将虾青素溶液和步骤(4)所得的植物乳杆菌细胞膜溶液混合，使用挤出器重复挤压，即得负载虾青素的纳米微囊；其中，所述虾青素溶液与植物乳杆菌细胞膜溶液的体积比为5～15：6～12；

步骤(2)中，所述种子培养基包括下述体积百分比的组分：豆油1～3％，硫酸铵0.05～0.2％，葡萄糖0.5～0.8％，鱼蛋白胨0.5～0.8％，硫酸镁0.05～0.1％，磷酸二氢钾0.05～0.1％；

步骤(2)中，所述发酵培养基包括下述体积百分比的组分：豆油5～8％，硫酸铵0.05～0.2％，葡萄糖0.5～2％，鱼蛋白胨0.5～2％，硫酸镁0.5～2％，磷酸二氢钾0.5～2％。

2.根据权利要求1所述的虾青素纳米微囊的制备方法，其特征在于：步骤(2)中，用对硝基苯酚法测定酶活。

3.根据权利要求1所述的虾青素纳米微囊的制备方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，整个提取过程须在避光条件下进行。