[发明专利]一种牛精液冷冻稀释液及其制备方法与应用

说明书

本发明提供一种牛精液冷冻稀释液，包括一液和二液；一液包括卵黄、三羟基氨基甲烷、柠檬酸、果糖、乳糖、棉籽糖、青霉素和链霉素；二液包括一液、甘油、丙酮酸、青霉素和链霉素。本发明的有益效果是：本发明在一定程度上提高了精子冷冻解冻后的完整性，且在显微镜下观察拥有清晰的视野，更适合对解冻后精液进行观察、检测和操作。

技术领域

本发明涉及动物精液稀释液领域，更具体地说涉及一种牛精液冷冻稀释液及其制备方法，本发明更公开了牛精液冷冻稀释液在提高牛精液冷冻解冻后品质和增加镜检视野清晰度方面的应用。

背景技术

牛是一种世代间隔长，繁殖率低的畜种；在牛的育种过程中，牛群的生产水平在很大程度上取决于种公牛的遗传水平，种公牛对牛群整体遗传改良的贡献可以达到总遗传进展的75％-95％。因此选育出优秀的种公牛，生产尽可能多的高质量冻精，保证母牛的受胎率在繁殖育种工作中尤为重要。

精子结构、生化和生理功能在冷冻解冻过程中会受到严重破坏，如何将精液在冷冻解冻过程所受的损伤降到最低一直是研究的热点。牛的精液冷冻保存不仅可以延长精子的存活时间，使精子不受时间、地域以及动物自身的限制，最大限度地提高种公牛的利用率，降低生产成本，而且对加速新品系的育成有重要的作用，也可以起到保护优良种质资源的作用。最先进行精液冷冻尝试的是意大利研究者Spallanzani，他在1787年以冰雪为冷源对人和马的精液进行冷冻保存试验，在加热升温解冻后发现仍有少数的精子能存活，这一发现为后来进行马精子保存技术及精子冻融损伤机制的研究奠定了基础。20世纪初，研究者将制冷技术与精液冷冻技术结合，开始了精液超低温冷冻保存的研究。在精液冷冻保存过程中，选择合适的稀释液成分对解冻后精子的品质十分重要。精子对温度非常敏感，尤其是在15～-60℃时，精子易受低温打击，冷冻保存过程中细胞内冰晶的形成是影响解冻后精子质量的主要原因之一，冷冻效果的好坏在一定程度上取决于稀释液组分中的冷冻保护剂。

近些年，随着国外冻精生产设备的不断引进和精液冷冻生产流程的改进，冷冻精液生产技术已取得长足进步，但仍存在一些问题，表现为冷冻解冻后的精子活力差、畸形率高，且国内外现用的精液稀释液多为卵黄稀释液，由于卵黄中存在较多的脂类，在应用中存在黏度过大、蛋黄脂肪颗粒大而不均匀，影响精子运动速率的问题，且不利于冷冻解冻后的观察与操作等问题。

发明内容

本发明克服了现有技术中的不足，提供了一种牛精液冷冻稀释液，另一目的是提供一种牛精液冷冻稀释液的制备方法，及提高牛精液冷冻解冻后品质和增加镜检视野清晰度方面的应用。

本发明的目的通过下述技术方案予以实现。

一种牛精液冷冻稀释液，包括一液和二液；

所述一液包括卵黄、三羟基氨基甲烷、柠檬酸、果糖、乳糖、棉籽糖、青霉素和链霉素；

所述二液包括一液、甘油、丙酮酸、青霉素和链霉素。

优选的，每100ml所述一液各原料的含量包括：15-25ml卵黄、1.2-1.4g三羟基氨基甲烷、0.5-0.9g柠檬酸、0.2-0.4g果糖、1-2g乳糖、2-3g棉籽糖、10万国际单位青霉素、10万国际单位链霉素和余量为水。

在上述任一方案中优选的是、每100ml所述一液各原料的含量包括：20ml卵黄、1.375g三羟基氨基甲烷、0.75g柠檬酸、0.375g果糖、1.5g乳糖、2.7g棉籽糖、10万国际单位青霉素、10万国际单位链霉素和75ml水。

在上述任一方案中优选的是，每100ml所述二液各原料的含量包括：80-90ml一液，10-15ml甘油，0.3-0.4g丙酮酸，10万国际单位青霉素和10万国际单位链霉素。

在上述任一方案中优选的是，每100ml所述二液各原料的含量包括：86ml一液，14ml甘油，0.36g丙酮酸，10万国际单位青霉素和10万国际单位链霉素。