[发明专利]SLC12A9抗体的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种SLC12A9抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤；

S01：抗原的制备：目标多肽和载体蛋白结合形成多肽交联复合物；

S02：制备抗体血清：将步骤S01中的多肽交联复合物制备成悬浮液，并对动物进行免疫，得到抗体血清；

S03：抗体纯化：采用亲和层析的方法对抗体血清进行纯化，得到多克隆抗体；

所述目标多肽为PRAPGSPRALNPQDYC；

所述载体蛋白为KLH，所述多肽交联复合物的制备方法为：

1）将20mg KLH溶于2mL ,5mM的EDTA水溶液中；

2）称取8mg Sulfo-SMCC完全溶于50μL DMSO中，之后加入150μL 1× PBS,混合均匀；

3）将步骤2中混合得到的溶液逐滴加入到步骤1混合得到的溶液中，边加边轻轻摇晃，室温放置1h；

4）将步骤3中活化好的溶液放入透析袋中，透析夹夹好，于2L的1× PBS中，4℃冰箱磁力搅拌下透析1h；

5）更换新的2L的1× PBS透析2h，重复一次；将活化透析好的KLH置于15mL进口离心管中，并在管上标记上试剂名称、时间和浓度，4℃冰箱保存；

6）称取4mg多肽，溶于50μL的DMSO中，再加入200μL的1× PBS，快速混匀，随后按照多肽：KLH＝1mg：680μg的比例立即加入活化透析好的KLH，4℃冰箱过夜或者室温下反应2h；

7）将步骤6中交联好的KLH-peptide交联复合物放入透析袋中，透析夹夹好，于4L的1×PBS中，4℃冰箱磁力搅拌下透析过夜；

将步骤7中透析好的KLH-peptide取出到干净的1.5mL离心管中，按照免疫剂量进行分装，-20℃冰箱保存。

2.根据权利要求1所述的SLC12A9抗体的制备方法，其特征在于，步骤S02中，将多肽交联复合物制备成悬浮液进行免疫的具体步骤为：首次免疫时，将多肽交联复合物和弗氏完全佐剂以体积比1:1混合乳化后，对动物进行注射，第二、三、四次免疫将多肽交联复合物和弗氏不完全佐剂以体积比1:1混合乳化后，对动物进行注射。

3.根据权利要求1所述的SLC12A9抗体的制备方法，其特征在于，步骤S02中，从动物血清中制备抗体的具体步骤为：第一天进行首次免疫，首次免疫后第14天进行二次免疫，二次免疫到三次免疫间隔时间为7天；兔子三次免疫后第7天耳中动脉采集血清小样，7天后加免，第四次免疫完7天后采集全血。