[发明专利]一种酶切探针恒温检测SARS-CoV-2新型冠状病毒核酸的试剂盒

说明书

本发明提供一种酶切探针恒温检测SARS‑CoV‑2新型冠状病毒核酸的试剂盒，所述试剂盒包括：检测SARS‑CoV‑2新型冠状病毒ORF1ab基因等温扩增引物和相应可被RNaseH酶切的含RNA碱基探针；其中该碱基探针的RNA碱基左、右两端分别标记报告荧光基团和淬灭基团。利用高效的恒温扩增的引物与探针，可以对SARS‑CoV‑2新型冠状病毒进行恒温的多重检测，具有高灵敏度与高特异性。本发明的新型冠状病毒核酸检测试剂盒，具有较高的灵敏度和特异性，实现对新型冠状病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要进行新型冠状病毒感染诊断或鉴别诊断者的咽拭子、肺泡灌洗液和痰液样本的检测，具有简便、快速、准确的特点。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别涉及一种酶切探针恒温检测SARS-CoV-2新型冠状病毒核酸的试剂盒。

背景技术

冠状病毒为不分阶段的单股正链RNA病毒，属于巢病毒目冠状病毒科正冠状病毒亚科，根据其血清型和基因组特点，分为α、β、γ、δ四个属。已知感染人的冠状病毒有7种，包括HCoV-OC43、HCoV-229E、HCoV-HKU1、HCoV-NL63、MERSr-CoV、SARSr-CoV和新发现的SARS-CoV-2；SARS-CoV-2是一种β属的新型冠状病毒。

SARS-CoV-2对紫外线和热敏感，56℃30min、乙醚、75％乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸等均可有效灭活冠状病毒。基于目前的流行病学调查和研究成果，潜伏期为1-14天，多为3-7天；感染途径主要为SARS-CoV-2感染患者，目前SARS-CoV-2表现出来的主要症状为发热、咳嗽、乏力、肌肉疼痛或者不适；重症表现为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒、出凝血功能障碍，感染途径还包括无症状感染者，无症状感染者的存在可导致疑似感染者及密切接触者数量大量增加，加速疫情的蔓延。

新型冠状病毒肺炎的诊断基于流行病学史、临床表现及影像学表现，而病毒的核酸检测可为其诊断提供直接证据，促进患者的隔离、治疗和评估，同时还能为疫情防控中心及时切断传播途径、有效控制传染源提供指导，保障疫情的防控。目前我国《新型冠状病毒肺炎诊疗方案》中推荐用实时荧光RT-PCR技术，该技术具有高度灵敏、高特异性，是目前核酸检测广泛运用的方法。但由于PCR方法对实验室，设备等要求较高，不能满足一些室外环境或较落后地区的检测，因此需要开发一种简便、快速的SARS-CoV-2 检测试剂盒。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种酶切探针恒温检测SARS-CoV-2新型冠状病毒核酸的试剂盒，所述试剂盒包括：检测SARS-CoV-2新型冠状病毒ORF1ab基因等温扩增引物和相应可被RNaseH酶切的含RNA碱基探针；其中该碱基探针的RNA碱基左、右两端分别标记报告荧光基团和淬灭基团。

在一种实施方式中，所述检测SARS-CoV-2新型冠状病毒ORF1ab基因等温扩增引物是SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.6和相应可被RNaseH酶切的探针是SEQ ID NO.7，该探针中包括一个RNA碱基，斜体小写字母表示的碱基为RNA碱基，T修饰报告荧光基团，淬灭基团修饰在3'末端；

在一种实施方式中，试剂盒还包括检测一段人工合成且与SARS-CoV-2新型冠状病毒及人源核酸均非同源的内参基因等温扩增引物SEQ ID NO.8-SEQ ID NO.13和相应可被RNaseH酶切探针SEQ ID NO.14，该探针中包括一个RNA碱基，斜体下划线小写所显示的碱基为RNA碱基，T修饰报告荧光基团，淬灭基团修饰在3'末端；

在一种实施中，所述内参基因为植物中一段随机组合序列。