[发明专利]免疫球蛋白结合蛋白及其应用

说明书

本发明涉及免疫球蛋白分离纯化技术领域，具体而言，涉及一种免疫球蛋白结合蛋白及其应用。所述免疫球蛋白结合蛋白由葡萄球菌蛋白A的E、C和Z‑domain拼接得到，并意外获得了抗体载量的提升和耐碱特性，进而可用于免疫球蛋白的亲和层析。

技术领域

本发明涉及免疫球蛋白分离纯化技术领域，具体而言，涉及一种免疫球蛋白结合蛋白及其应用。

背景技术

随着生物技术的出现和发展，对疾病的预防和治疗发生了革命性的变革。如今的生物技术几乎渗透到我们生活的每一个角落，而在这其中针对于抗体的研究也成绩凸显。从多克隆抗体、单克隆抗体再到重组抗体，每一次技术的飞越都会给人们无限的惊喜。但是，像所有其他蛋白质药物一样，抗体的生产技术、生产规模以及纯化技术是制约抗体生产的重要技术环节。而抗体纯化技术又成为了关键，纯化技术的好与坏，规模的大与小，往往决定了一个抗体药物生产的生命力。

将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来，这种分离纯化蛋白质的方法称为亲和层析。在生物分子中有些分子的特定结构部位能够同其他分子相互识别并结合，如酶与底物的识别结合、受体与配体的识别结合、抗体与抗原的识别结合，这种结合既是特异的，又是可逆的，改变条件可以使这种结合解除。生物分子间的这种结合能力称为亲和力。亲和层析就是根据这样的原理设计的蛋白质分离纯化方法，利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其它分子的层析技术。

亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。此法具有高效、快速、简便等优点。

葡萄球菌蛋白 A（staphylococcus protein A，SPA）含有5个可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合的结构域，它是金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）细胞壁中的一种组成蛋白，金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌，是医院中交叉感染中常见的一种化脓感染菌，菌体直径约为 0.8µm，呈小球型，因聚堆呈葡萄串型而得名。SPA能够结合很多哺乳动物IgG抗体（常常是Fc段），因而是最早应用于亲和层析并进行抗体纯化的蛋白之一。

但是，由于SPA其本身也是一种蛋白，因而在亲和吸附及洗脱时的理化性质要求较高，特别对碱性试剂的耐性较差，并且其结合抗体的载量也常常不甚理想。

发明内容

本发明涉及一种免疫球蛋白结合蛋白，其具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

根据本发明的再一方面，本发明还涉及一种蛋白多聚体，其含有两个或多个SEQID NO:1所示的重复单元。

本发明还涉及所述免疫球蛋白结合蛋白及蛋白多聚体相关的核酸、载体、宿主细胞及生产方法。

根据本发明的再一方面，本发明还涉及一种亲和层析介质以及含有所述亲和层析介质的亲和层析分离装置，所述层析介质包括固相载体和接枝于所述固相载体上的配基；

所述配基为如上所述的免疫球蛋白结合蛋白或如上所述的蛋白多聚体。

本发明还涉及上述产品从液体介质分离或富集免疫球蛋白的用途。

所述免疫球蛋白结合蛋白由葡萄球菌蛋白 A的E、C和Z-domain拼接得到，并意外获得了抗体载量的提升和耐碱特性，进而可用于免疫球蛋白的亲和层析。

附图说明