[发明专利]提高蛋白表达量的信号肽及其应用有效
| 申请号： | 202010749129.8 | 申请日： | 2020-07-30 |
| 公开（公告）号： | CN111808177B | 公开（公告）日： | 2022-06-21 |
| 发明（设计）人： | 佟毅;李义;陶进;刘松;徐奎栋;李江华;陈坚 | 申请（专利权）人： | 吉林中粮生化有限公司;江南大学 |
| 主分类号： | C07K14/32 | 分类号： | C07K14/32;C12N15/31;C12N15/75;C12N9/44;C07K19/00;C07K14/435;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇钰莹 |
| 地址： | 130000 吉林省长*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 提高 蛋白 表达 信号肽 及其 应用 | ||
1.编码信号肽的核苷酸，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1~3任一所示。
2.一种提高枯草芽孢杆菌胞外蛋白表达量的方法，其特征在于，向编码蛋白的核苷酸序列的N端添加权利要求1所述编码信号肽的核苷酸，所述蛋白为普鲁兰酶。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）在蛋白的N端添加权利要求1所述编码信号肽的核苷酸，获得编码重组蛋白的基因；
（2）构建表达步骤（1）所述基因的重组质粒，再将构建的重组质粒导入枯草芽孢杆菌。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述普鲁兰酶的NCBI登录号为AMQ67157。
5.一种重组质粒，其特征在于，连接有核苷酸序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2或SEQID NO.3所示的编码信号肽的核苷酸。
6.一种提高蛋白表达量的方法，其特征在于，利用含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1~3所示任一的编码信号肽的核苷酸的基因工程菌发酵生产蛋白，所述蛋白为NCBI登录号为AMQ67157的普鲁兰酶。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，将所述重组菌以1~10mL/100mL的接种量接种至培养体系中，所述基因工程菌接种时的OD600不低于3.0。
8.一种宿主细胞，其特征在于，含有核苷酸序列如SEQ ID NO.1~3所示任一的编码信号肽的核苷酸，或含有权利要求5所述重组质粒。
9.权利要求1所述编码信号肽的核苷酸，或权利要求2~4或权利要求6或7任一所述方法，或权利要求5所述重组质粒，或权利要求8所述宿主细胞在提高普鲁兰酶表达量中的应用。
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