[发明专利]一种蛋白质芯片技术检测肺癌免疫检查点检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种蛋白质芯片技术检测肺癌免疫检查点检测试剂盒，包括固定蛋白质，所述固体蛋白质通过表面清洗和表面涂覆处理，①将已知的免疫检查点PD‑1、PD‑L1、CTLA‑4蛋白受体固定上，②根据这些生物分子的特性捕获与其特异性结合的待测患者血清、血浆、淋巴、渗出液、细胞溶液和分泌液中PD‑1、PD‑L1、CTLA‑4，使其充分发生抗原抗体反应。③而后经洗涤和纯化后再进行确认和生化分析。本发明只需一次实验即可检测多种抗体的血清情况，具有省时、高效和高通量平行检测的有点，是现代免疫学技术和蛋白质新材料技术的结晶，且检测结果不仅可通过肉眼定性观察，也可配置阅读仪定量检测，结果能够长期保存，具有重复性好、稳定性和灵敏度高以及特异性强的效果。

技术领域

本发明涉及蛋白质芯片肺癌免疫检测技术领域，尤其是涉及一种蛋白质芯片技术检测肺癌免疫检查点检测试剂盒。

背景技术

T细胞是肿瘤免疫答应中的主要效应细胞，在生理情况下T细胞的免疫应答受到共抑制分子即免疫检查点的调节，维持对自身组织的耐受，从而避免自身免疫疾病的发生，共刺激因子CD28与抗原提呈细胞表面的CD28/CD86相互作用，使细胞毒T淋巴细胞相关抗原4（CTLA-4）向胞膜转移，以更强的结合力与CD28/CD86结合，抑制T细胞的活化与增值，程序性死亡受体1（PD-1）在T细胞、自然杀伤细胞（NK）、单核细胞及B细胞整多钟细胞中表达，其功能与CTLA-4相似，程序性死亡配体1（PD-L1）主要在肿瘤细胞表面及肿瘤微环境中表达，肿瘤细胞可异常上调共抑制分子及其相关配体的表达，抑制T淋巴细胞活化，从而导致肿瘤免疫逃逸，随着近年来通过单克隆抗体阻断免疫监测点，如分子PD-1、PD-L1、CTLA-4的研究较为广泛，且研究显示上述分子具有显著的抗肿瘤效应，目前从二线治疗到一线治疗再到联合治疗，免疫检查点抑制剂疗法逐步提高了肺癌治疗的效果，正在改变肺癌的治疗策略。

结合上述，1、在非小细胞肺癌（NSCLC）的二线治疗中，免疫检查点抑制剂已取得突破性进展，PD-1抑制剂Nivolumab用于进展期肺鳞癌和非鳞状 NSCLC 的Ⅲ期临床研究结果显示，Nivolumab组患者的总生存期（OS）、客观缓解率（ORR）、无进展生存期（PFS）及1 年生存率均明显提高。目前，美国 FDA已批准Nivolumab用于以铂类为基础化疗方案的进展晚期( 转移性) 肺鳞癌及非鳞状NSCLC的治疗。PD-1抑制剂 Remborolizunab治疗进展期 NSCLC的Ⅰ期临床研究显示，患者ORR中位缓解持续时间（MDR）明显延长，且PD-L1 高表达，即肿瘤细胞 PD-L1 染色阳性比例（TPS）≥50% 的患者疗效更为显著。基于此结果，美国FDA批准Remborolizunab用于二线治疗PD-L1阳性（TPS≥1%）且在含铂化疗期间或之后发生疾病进展的NSCLC患者。PD-L1抑制剂Atezolizumad治疗NSCLC患者的Ⅲ期临床研究显示，Atezolizumad治疗组中位OS比多西他赛化疗组平均延长了4.2个月。美国FDA批准Atezolizumad用于接受含铂化疗治疗期间或治疗后病情进展以及接受靶向疗法治疗失败的转移性NSCLC患者。

2、Nivolumab单药用于晚期的NSCLC患者一线治疗的Ⅰ期临床研究也取得了一定的成果，但近期公布的Ⅲ期临床研究（CheckMate-026）宣布失败Reck等临床研究首次证实了Pembrolizumad单药一线治疗晚期NSCLC的效果优于标准含铂双药化疗，促使了Pembrolizumab获得美国FDA和欧盟要品监管（EMA）批准，用于治疗PD-L1高表达（TPS≥50%）、表皮生长因子受体（EGFR）及ALK突变阴性的转移性NSCLC患者,langer等研究显示与单纯化疗相比，Keytruda联合化疗的肺癌患者ORR和PFS均有显著提高，基于此项研究，美国FDA加速批准了Keytruda联合化疗一线治疗转移性非鳞状NSCLC，CTLA-4代表抑制剂有Ipilimumab(MD*010)及Tremelimumad，在Ⅱ期临床研究中Ipilimumab二线治疗Ⅵ期NSCLC的结果提示该方案可提高患者的PFS及OS但在后续Ⅲ期临床研究中期分析未显示出临床获益，因而终止了研究，在铂类联合化疗后维持治疗的NSCLCⅡ期临床研究中Tremelimumad不能延长患者PFS。