[发明专利]一种循环肿瘤细胞高通量磁力分选方法

权利要求书

1.一种循环肿瘤细胞高通量磁力分选方法，其特征在于，所述方法步骤如下：

(1)样本纯化：将患者全血样本与分选磁珠混合孵育，所述磁珠与全血中的靶标细胞结合；磁珠孵育后的全血样本经过微流控芯片的纯化结构区去除小于分选临界半径的细胞；

(2)细胞聚焦：将步骤(1)纯化后的样本进行细胞聚焦，将大于分选临界半径的细胞聚焦到芯片中央位置，小于分选临界半径的细胞仍保持原路径；

(3)磁力分选：将步骤(2)经过细胞聚焦后的样本进行磁珠分选，磁珠结合细胞在磁力架的吸引下分流至磁珠细胞收集口进行收集，非磁珠结合细胞仍保持直线形流入非磁珠细胞收集口流出进行收集，从而完成对循环肿瘤细胞的分选；

所述分选方法利用微流控芯片进行，所述微流控芯片包括进样部(1)、微流控分选区(2)和出样部(3)，所述微流控分选区(2)为封闭的腔式结构，所述进样部(1)和所述出样部(3)分别与所述微流控分选区(2)两端连接；所述进样部(1)包括血液样本进样口(11)和缓冲液进液口(12)；所述出样部(3)包括磁珠细胞收集口(31)和非磁珠细胞收集口(32)；其特征在于：

所述微流控分选区(2)包括三个互相连通的结构区，分别为纯化结构区(21)、细胞聚焦结构区(22)及磁珠分选结构区(23)；所述进样部(1)与纯化结构区(21)首端连接，所述细胞聚焦结构区设于所述纯化结构区(21)及磁珠分选结构区之间，所述磁珠分选结构区(23)尾端与所述出样部(3)连通；

所述步骤(1)样本纯化是通过纯化结构区(21)进行的，所述纯化结构区(21)设有用于去除全血样本中红细胞及血小板的初滤结构，所述纯化结构区(21)还设有废液出口(218)；

所述步骤(2)细胞聚焦是通过细胞聚焦结构区(22)进行的，所述细胞聚焦结构区(22)由两根并排设置且相互独立的聚焦分支通路(221)构成；两根所述聚焦分支通路(221)以所述细胞聚焦结构区(22)的轴线为对称轴相互镜像对称设置，所述聚焦分支通路(221)的顶面外壁为水平顶壁(222)，该顶面的内壁设有若干线型凸棱(223)，各凸棱(223)平行设置且与所述对称轴呈设定角度地倾斜设置；

所述步骤(3)磁力分选是通过磁珠分选结构区(23)进行的，所述磁珠分选结构区(23)的两侧对称设有可吸引磁珠的磁铁(231)；

所述各个凸棱(223)与所述对称轴倾斜设置夹有锐角，其中所述锐角朝向于所述磁珠分选结构区(23)；

所述锐角角度为60°-70°；

所述凸棱(223)的条件参数为：d＜Hg≤2d、Ht＞Hg、Dob＞2d≥Lob；所述d为聚焦细胞的直径，Hg为凸棱(223)与底面的垂直距离，Ht为凸棱(223)的高度，Dob为凸棱(223)之间的水平距离，Lob为凸棱(223)的水平宽度。

2.如权利要求1所述的循环肿瘤细胞高通量磁力分选方法，其特征在于，所述靶标细胞为循环肿瘤血细胞或白细胞。

3.如权利要求1的所述的循环肿瘤细胞高通量磁力分选方法，其特征在于，所述磁珠直径大于5μm小于10μm。

4.如权利要求1的所述的循环肿瘤细胞高通量磁力分选方法，其特征在于，所述步骤(1)中分选临界半径为5μm。

5.如权利要求1的所述的循环肿瘤细胞高通量磁力分选方法，其特征在于，所述步骤(2)中分选临界半径为10μm。

6.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞高通量磁力分选方法，其特征在于，所述聚焦分支通路(221)的宽度大于等于400μm；长度大于等于1.5cm。

7.根据权利要求1所述的循环肿瘤细胞高通量磁力分选方法，其特征在于，所述细胞聚焦结构区(22)的中心区域对应所述非磁珠细胞收集口(32)，所述中心区域的两侧区域对应所述磁珠细胞收集口(31)，所述中心区域为细胞聚焦结构区(22)的对称轴向两侧延伸至总宽度的1/2区域。