[发明专利]甲基营养型芽孢杆菌及其发酵培养方法、生防菌剂、应用

说明书

本发明涉及菌株培育技术领域，特别涉及甲基营养型芽孢杆菌及其发酵培养方法、生防菌剂、应用。该甲基营养型芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.11232。本发明提供的甲基营养型芽孢杆菌IBFCBF‑3具有抗真菌范围广、拮抗效果显著的特性，可用于防治植物土传真菌病，因而具有良好的工业化应用前景。同时，本发明提供的甲基营养型芽孢杆菌IBFCBF‑3在大田实验中防效显著，对农作物病害防治具有很大的实用价值，且对农作物具有很好的促生长效果。

技术领域

本发明涉及菌株培育技术领域，特别涉及甲基营养型芽孢杆菌及其发酵培养方法、生防菌剂、应用。

背景技术

土传病害是指病原体如真菌、细菌、线虫和病毒随病残体生活在土壤中，条件适宜时从作物根部或茎部侵害作物而引起的病害。包括立枯、纹枯、青枯、枯萎、疫病、猝倒、根腐、软腐、根结线虫、胞囊线虫等众多植物的土传病害。这些病害通常侵染植物根部或茎部，从而引起作物根茎部乃至全株发病，造成重大经济损失。

目前主要是通过化学药剂对土传病害进行防控，而化学药剂的长期使用，会造成水源土壤污染、生态平衡被破坏、农药残留、次要病害猖獗和使病源微生物产生抗药性等一系列严重的后果。随着人们环保意识的增强，对食品安全问题的重视，以及对生态环境建设，保护生物多样性和农业可持续发展的要求，使得生物防控土传病害成为当前研究和开发的热点。

芽孢杆菌(Bacillus sp.)是一类产芽孢的革兰氏阳性细菌，好氧或兼性厌氧生活，能够产生耐热、耐旱、抗紫外线和抗有机溶剂的内生孢子，所产芽孢可制成粉剂、可湿性粉剂等各种剂型，且与化学农药混用后不失活，是理想的生防菌筛选对象。在芽孢杆菌中，甲基营养型芽孢杆菌是一种具有广谱抑菌活性的细菌，该枯草芽孢杆菌具有较强的代谢产物产生能力，能够产生多种抑菌物质，因而具有较好的应用前景。

公开号CN105557756A、CN105670958A中分别公开了两种甲基营养型芽孢杆菌，但还需要筛选出抑菌能力更强、抑菌谱更广的甲基营养型芽孢杆菌。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了甲基营养型芽孢杆菌及其发酵培养方法、生防菌剂、应用。该甲基营养型芽孢杆菌IBFCBF-3具有抗真菌范围广、拮抗效果显著的特性。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种甲基营养型芽孢杆菌，其保藏编号为CGMCC No.11232。

在本发明中，甲基营养型芽孢杆菌的筛选方法包括如下步骤：

通过多点采样法采集土样，将采集到的土样研细，制成不同浓度的土壤悬浮液；土样取自湘西自治州泸溪；

选取浓度为10^-5～10^-7的土壤悬浮液，加入到NA培养基平板上进行涂布处理，在30℃条件下培养，得到菌落；

挑选单菌落进行划线保种，培养20～30小时，得到甲基营养型芽孢杆菌。

在本发明中，NA培养基的组成包括：10g/L的胰蛋白胨，3g/L的牛肉粉， 5g/L的NaCl，20g/L的琼脂；pH值为7.2～7.4。

本发明还提供了该甲基营养型芽孢杆菌的发酵培养方法，包括如下步骤：将甲基营养型芽孢杆菌接种在灭菌后的液体培养基中，在25～30℃下进行震荡培养2～4d，然后离心。

作为优选，液体培养基组成为10g/L的胰蛋白胨，3g/L的牛肉粉，20g/L 的蔗糖，5g/L的NaCl；pH值为7.2～7.4。

作为优选，震荡培养的转速100～300r/min；离心的转速为10000～15000 r/min，时间为2～10min。

优选地，震荡培养的转速180r/min；离心的转速为12000r/min，时间为 5min。