[发明专利]一种人鼠卵透明带融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种人鼠卵透明带融合蛋白及其制备方法和应用。所述人鼠卵透明带融合蛋白，由人类卵透明带肽段和小鼠卵透明带肽段组成，兼有两个物种的卵透明带蛋白，可以表达产生人透明带和小鼠透明带的融合蛋白，可以一次性表达、一次性免疫、一次性分离制备抗人透明带和小鼠透明带的两种抗体，用于人类和小鼠两类常用材料的实验，节省人力物力，又不影响实验效果。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，更具体地，涉及一种人鼠卵透明带融合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

透明带是卵细胞外的一层细胞外壳，在卵子发育和受精中有重要作用，是受精研究的重要靶标分子，是发展避孕疫苗的候选抗原。因此抗透明带抗体是受精和发育研究中的重要工具。但由于天然来源很有限，传统制备抗透明带抗体的方法受到很大的制约，现在制备抗体主要通过基因表达获得透明带抗原，由于透明带分子结构的特殊性，给透明带的制备带来一些实际困难，因此目前市场上的抗透明带抗体较昂贵。透明带是高度特异的蛋白质，既有组织特异性，分布于卵巢组织中，又有种族特异性，不同种动物的透明带有免疫特异性。因此要分别制备各自的抗体，然而目前抗体造价较高。

由于人类透明带和小鼠透明带是当今实验研究使用很多的实验材料，不同物种间的卵透明带有明显的种族特异性。实际上，不同动物的研究在不同体系中进行，用于不同动物的抗透明带抗体在不同的研究体系不存在干扰现象，而实验研究中，往往不会几物种材料同时做实验，尤其是人源实验材料不会与其它动物来源的实验材料同时安排在一个实验体系里，不涉及不同物种间的抗透明带抗体的交叉干扰。但是目前，关于人类透明带和小鼠透明带抗体的制备均是先各自分别制备不同的透明带抗原，再免疫分别制备各自的抗体，例如：乜春城等(2011)制备了小鼠ZP2肽(乜春城，禹艳红，谢妍，曹佐武.小鼠ZP2肽的基因克隆和原核表达载体的构建.暨南大学学报(医学版)2011,32(4):374～378))，曹佐武等(2013)制备了人ZP3肽(曹佐武，徐放，谢琪璇，乜春城，姚冠颖。人ZP3的N端肽的体外表达.暨南大学学报(医学版)2013，34(6)：583-587)；不仅费时费力，且成本较高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供一种人鼠卵透明带融合蛋白。

本发明的另一目的在于提供所述人鼠卵透明带融合蛋白的制备方法。

本发明的再一目的在于提供所述人鼠卵透明带融合蛋白的应用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

一种人鼠卵透明带融合蛋白，由人卵透明带蛋白成分和小鼠透明带蛋白成分组成。

本发明设计了一种融合蛋白，由人类的卵透明带蛋白成分和小鼠的透明带蛋白成分组成，兼有两个物种的卵透明带蛋白。由于卵透明带蛋白是多表位的大分子，包含有许多抗原决定簇，许多不同的片段都可以诱发抗体，因此可以选用人类的卵透明带蛋白和小鼠的透明带蛋白中不同的肽段组成融合蛋白，以诱发产生两种不同的特异性抗体。可以一次性表达、一次性免疫、一次性分离制备抗人透明带和小鼠透明带的两种抗体，用于人类和小鼠两类常用材料的实验，节省人力物力，又不影响实验效果。

具体地，所述人鼠卵透明带融合蛋白由人卵透明带蛋白中具有抗原表位的肽段和小鼠透明带蛋白中具有抗原表位的肽段。本发明对融合蛋白中的人或鼠的卵透明带肽段的序列不做任何限定，任何可以诱发动物机体产生抗体的人或鼠的卵透明带蛋白中的肽段均在本发明保护范围内。

透明带有ZP1，ZP2，ZP3三种成分组成，其中ZP2和ZP3是较重要的成分。优选地，本发明提供一种人鼠卵透明带融合蛋白，包含hZP3 23～231肽段和mZP2 192～505肽段，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。由人透明带3肽成分和小鼠透明带2肽成分组成，是由hZP3+mZP2，两种不同物种和不同类型透明带蛋白搭配的融合蛋白。