[发明专利]结合疫苗中的游离多糖含量测定方法

说明书

本发明揭示了一种结合疫苗中的游离多糖含量测定方法，包括以下步骤：对结合疫苗原液进行盐析处理；向经盐析处理后的原液中加入无水乙醇，得到混合液A；对所述混合液A进行离心处理，分离，得到多糖蛋白结合物和游离糖的混合沉淀物；步骤S4：将所述混合沉淀物加入到水中，得到混合液B；对所述混合液B进行离心处理，收集上清液作为测试液；测定所述测试液的多糖含量，记为结合疫苗中的游离多糖含量。本发明提供的结合疫苗中的游离多糖含量测定方法，通过加入乙醇使结合疫苗中的多糖结合蛋白发生不可逆变性，以沉淀并分离结合疫苗中的多糖结合蛋白，从而减小结合疫苗中的多糖结合蛋白对游离多糖含量的测定的影响，以获得更准确的游离多糖含量。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种结合疫苗中的游离多糖含量测定方法。

背景技术

结合疫苗的有效成分为多糖蛋白结合物，该结合物能够引起机体胸腺依赖性免疫应答，对幼儿起到长期的保护作用；而游离多糖没有免疫原性和免疫记忆，当游离多糖过多时会到结合疫苗的免疫原性产生一定影响，因此游离多糖含量是结合疫苗在开发和生产过程中一项重要的质量控制参数。现有的多糖含量测定方法通常为蒽酮法，而采用蒽酮法得到的测定结果会把结合态的多糖含量包含进去，从而影响测定结果的准确性。

因此，针对上述技术问题，有必要提供一种结合疫苗中的游离多糖含量测定方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简单、准确率高的结合疫苗中的游离多糖含量测定方法，以解决现有技术中的问题。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案如下：

一种结合疫苗中的游离多糖含量测定方法，包括以下步骤：

步骤S1：对结合疫苗原液进行盐析处理；

步骤S2：向经盐析处理后的原液中加入无水乙醇，得到混合液A；

步骤S3：对所述混合液A进行离心处理，分离，得到多糖蛋白结合物和游离糖的混合沉淀物；

步骤S4：向所述混合沉淀物加水进行复溶，得到混合液B；

步骤S5：对所述混合液B进行离心处理，收集上清液作为测试液；

步骤S6：测定所述测试液的多糖含量，记为结合疫苗中的游离多糖含量。

进一步地，所述步骤S1中的盐析处理方式为：向所述结合疫苗原液中加入浓度为4.5～6mol/L的氯化钠溶液，混匀后静置。

进一步地，所述氯化钠溶液和结合疫苗原液的体积比为1:(1～2.5)。

进一步地，所述步骤S2中的结合疫苗原液和无水乙醇的体积比为1:(8～16)。

进一步地，所述步骤S3中的离心处理方式为：将所述混合液A置于离心机中，在离心力为(5500～6500)×g、温度为3～7℃的条件下，离心1～1.5小时。

进一步地，所述步骤S5中的离心处理方式为：将所述混合液B置于离心机中，在转速为3000～5000rpm、温度为12～18℃的条件下，离心10～20分钟。

本发明有益效果：

与现有技术相比，本发明提供的结合疫苗中的游离多糖含量测定方法，通过加入乙醇使结合疫苗中的多糖结合蛋白发生不可逆变性，以沉淀并分离结合疫苗中的多糖结合蛋白，从而减小结合疫苗中的多糖结合蛋白对游离多糖含量的测定的影响，以获得更准确的游离多糖含量。

具体实施方式

为了更充分理解本发明的技术内容，下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步介绍和说明。