[发明专利]一种白眉蛇毒血凝酶特征多肽及其在注射用蛇毒血凝酶种属鉴别中的应用

说明书

本发明提供了一种白眉蛇毒血凝酶特征多肽及其在注射用蛇毒血凝酶种属鉴别中的应用，待测样品及特征肽对照品分别溶解制成供试品及对照品溶液，经二硫苏糖醇及碘乙酰胺还原烷基化处理；碳酸氢氨溶液稀释后，加入酶进行水解；酶解结束后，高速离心，取上清液注入液相色谱‑质谱仪进行分析。采用酶解结合液相色谱‑串联质谱‑多反应监测(LC‑MS/MS‑MRM)方法，以三电荷935.8→861.4和三电荷935.8→602.3作为检测离子对提取离子流色谱图，对注射用白眉蛇毒血凝酶进行种属鉴别。该方法简便快捷，专属性强，填补了注射用白眉蛇毒血凝酶种属来源鉴定的空白，提高了质量控制水平。

技术领域

本发明涉及一种白眉蛇毒血凝酶特征多肽及其在注射用蛇毒血凝酶种属鉴别中的应用，属于蛇毒血凝酶制品种属鉴定领域。

背景技术

蛇毒血凝酶类药物是一类来源于不同蛇种的止血药，其主要活性成分蛇毒类血凝酶是一种具有精氨酸酯酶和酰氨酶活性的丝氨酸蛋白酶，可在凝血过程中发挥重要作用，主要用于出血性疾病的治疗。目前国内获批上市的蛇毒血凝酶类药物主要有注射用白眉蛇毒血凝酶（邦亭）、注射用矛头蝮蛇血凝酶（巴曲亭）、注射用尖吻蝮蛇血凝酶“苏灵”、兆科药业(合肥)有限公司的蛇毒血凝酶注射液（速乐涓）。

现行蛇毒血凝酶类药物的质量标准主要利用生化反应、化学显色反应、液相色谱-肽图对照法或凝胶电泳法等进行鉴别，但这些方法均未对该类生化药物的种属来源进行鉴别，对于未知样品无法确实其种属来源。由于不同蛇种来源的血凝酶其结构不同，发挥作用机制不同，对应的药理作用也存在差异，因此有必要建立一种具有种属特异性的血凝酶类药物的鉴别检测方法，加强该类产品的质量控制，保障临床用药的安全性。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种白眉蛇毒血凝酶特征多肽及其在注射用蛇毒血凝酶种属鉴别中的应用，本发明提供的特征多肽种属鉴别方法简便快捷，专属性强，填补了注射用蛇毒血凝酶质量标准的空白，大大提高了该类药物质量控制水平，有利于保证临床用药的安全性和有效性。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种白眉蛇毒血凝酶特征多肽，所述白眉蛇毒血凝酶特征多肽的氨基酸序列为：LDSPVSNSAHIAPLSLPSSAPSVGSVCR。

一种上述白眉蛇毒血凝酶特征多肽在注射用蛇毒血凝酶种属鉴别中的应用。

优选地，所述白眉蛇毒血凝酶特征多肽在注射用蛇毒血凝酶种属鉴别中的应用方法，包括以下步骤：

A：注射用蛇毒血凝酶及白眉蛇毒类凝血酶特征多肽对照品分别溶解制成供试品及对照品溶液；

B：分别取供试品溶液和对照品溶液，经二硫苏糖醇及碘乙酰胺还原烷基化处理；

C：还原烷基化结束后，经碳酸氢铵溶液稀释后，加入酶进行水解；

D：酶解结束后，高速离心，取上清液注入液相色谱-质谱仪进行分析；

E：在检测离子对的提取离子流色谱图中，若供试品溶液呈现与对照品溶液保留时间一致的色谱峰，则表明待测样品含有氨基酸序列LDSPVSNSAHIAPLSLPSSAPSVGSVCR，证明待测样品来源于白眉蝮蛇；反之，则为非白眉蝮蛇来源。

优选地，步骤E所述的检测离子对为三电荷935.8→861.4和三电荷935.8→602.3。

优选地，上述白眉蛇毒血凝酶特征多肽在注射用蛇毒血凝酶种属鉴别中的应用方法，具体采用以下步骤：