[发明专利]一种易分割的人鼠卵透明带融合蛋白及其制备方法和应用在审
申请号: | 202010754383.7 | 申请日: | 2020-07-30 |
公开(公告)号: | CN112142852A | 公开(公告)日: | 2020-12-29 |
发明(设计)人: | 曹佐武 | 申请(专利权)人: | 暨南大学 |
主分类号: | C07K19/00 | 分类号: | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C07K16/18;C07K16/06 |
代理公司: | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人: | 赵崇杨 |
地址: | 510632 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 分割 人鼠卵 透明 融合 蛋白 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种易分割的人鼠卵透明带融合蛋白,其特征在于,由人类卵透明带蛋白成分和小鼠的透明带蛋白成分组成,两者之间通过带有切割位点的连接肽连接。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,包含hZP3 23~231肽段和mZP2 192~505肽段,两者通过短肽链DDDDK连接而成,其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求2所述的融合蛋白,其特征在于,编码SEQ ID NO:1所示融合蛋白的融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
4.根据权利要求2所述的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白的C端连接有6×His标签肽。
5.权利要求1所述融合蛋白的制备方法,其特征在于,先构建体外表达所述融合蛋白的表达载体,再转化宿主菌,诱导表达产生融合蛋白。
6.权利要求2所述融合蛋白的制备方法,其特征在于,将pGEM-hZP3载体上的编码人ZP3的23~231肽段的DNA序列连接短肽链DDDDK的编码序列组成复合序列后插入到pET-mZP2表达载体多克隆位点N端的BamHI和EcoRI位点之间,构建表达hZP3 23~231肽和mZP2 192~505融合蛋白的表达载体,再转化宿主菌,诱导表达产生融合蛋白。
7.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述表达载体为pET原核表达载体。
8.根据权利要求6所述的制备方法,其特征在于,所述诱导表达为将宿主菌于35~37℃培养至OD600达0.4~0.6时,加入IPTG至终浓度0.8~1.2mmol/L,诱导表达6~10h。
9.权利要求1或2所述的融合蛋白在制备抗人卵透明带抗体和/或抗小鼠卵透明带的抗体中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于,将所述融合蛋白与免疫佐剂混合后免疫动物机体,取血分离血清或将融合蛋白用相应的酶切割,分别制备纯人透明带蛋白或纯小鼠透明带蛋白,再分别与免疫佐剂混合后免疫动物机体,分别取血分离血清。
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