[发明专利]一种双链RNA的应用

权利要求书

1.一种双链RNA在制备抗虫剂或培育抗虫的转基因植物中的应用，其特征在于，所述的双链RNA包含SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列。

2.一种包含双链RNA的载体或重组菌株，其特征在于，所述的双链RNA包含SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的载体或重组菌株，其特征在于，所述的载体包含SEQ ID NO：20所示的核苷酸序列。

4.一种双链RNA的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括采用靶向靶序列SEQ IDNO：3和/或SEQ ID NO：4的引物，扩增棉铃虫sNPF基因的cDNA序列，合成双链RNA。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：

获取棉铃虫sNPF基因的总RNA，反转录获得cDNA；优选为棉铃虫肠总RNA或脑总RNA，进一步优选为肠总RNA；

扩增所述的cDNA；优选扩增引物为SEQ ID NO：10、11；

将扩增获得的cDNA连接至载体后，转入细胞，提取质粒；

采用靶向靶序列SEQ ID NO：3和/或SEQ ID NO：4的引物，扩增提取的质粒，合成双链RNA；优选先采用引物SEQ ID NO：14和SEQ ID NO：15，然后采用引物SEQ ID NO：12和SEQ IDNO：13扩增提取的质粒，合成双链RNA。

6.一种包含双链RNA核苷酸序列的RNAi干扰载体的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括采用上游引物：包含酶切位点I、酶切位点II和SEQ ID NO：10，下游引物：包含酶切位点III、酶切位点IV和SEQ ID NO：11，扩增棉铃虫sNPF基因的cDNA，然后经酶切与载体连接获得RNAi干扰载体。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：

获取棉铃虫sNPF基因的总RNA，反转录获得cDNA；优选为棉铃虫肠总RNA或脑总RNA，进一步优选为肠总RNA；

采用上游引物：包含酶切位点I、酶切位点II和SEQ ID NO：10，下游引物：包含酶切位点III、酶切位点IV和SEQ ID NO：11，扩增cDNA，获得扩增产物；优选酶切位点I为SmaI识别位点、酶切位点II为EcoRI识别位点、酶切位点III为BamHI识别位点、酶切位点IV为HindIII识别位点；进一步优选采用引物SEQ ID NO：18、19扩增cDNA；

用酶切位点I对应的酶与酶切位点III对应的酶双酶切获得的扩增产物，获得目的片段1；

用酶切位点I对应的酶与酶切位点III对应的酶双酶切载体，获得载体骨架1；优选载体为pGreen-HY104；

将获得的目的片段1连接至载体骨架1上，获得重组质粒1；

用酶切位点II对应的酶与酶切位点IV对应的酶双酶切获得的扩增产物，获得目的片段2；

用酶切位点II对应的酶与酶切位点IV对应的酶双酶切获得的重组质粒1，获得载体骨架2；

将获得的目的片段2连接至载体骨架2上，获得RNAi干扰载体。

8.一种抗虫剂，其特征在于，所述的抗虫剂包含双链RNA或权利要求2-3任一所述的载体或重组菌株，所述的双链RNA包含SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列。

9.一种抗虫的转基因植物的培育方法，其特征在于，所述的培育方法包括：

将双链RNA、权利要求2-3任一所述的载体或重组菌株，导入出发植物，得到抗虫的转基因植物，所述的双链RNA包含SEQ ID NO：22所示的核苷酸序列。

10.根据权利要求9所述的培育方法，其特征在于，所述的抗虫为抗鳞翅目昆虫，所述的出发植物为单子叶植物或双子叶植物，优选为棉花出发植物。