[发明专利]一种保护神经细胞氧化应激的改善记忆力活性肽及其制备方法

说明书

一种保护神经细胞氧化应激的改善记忆力活性肽及其制备方法，属于活性肽制备技术领域。本发明以压榨后核桃粕(油脂质量分数为23.56％)为原料，采用螺杆挤压(单、双)和超声预处理，利用酶控制水解技术，增加底物浓度和水解度，通过分离纯化，制备具有保护神经细胞氧化应激的改善记忆力活性肽(＜3kDa)组分和氨基酸序列明确的核桃活性肽YVLLPSPK，其酶解底物浓度(质量分数)达到9％～15％，水解度达到29.3％～42％；核桃活性肽(＜3kDa)组分可以改善东莨菪碱诱导小鼠学习和记忆损伤，核桃肽YVLLPSPK可以改善Aβ_25‑35诱导PC12细胞氧化应激水平。本发明为活性肽工业化高效制备以及产品开发提供依据和参考。

技术领域

本发明属于活性肽制备技术领域，具体涉及一种直接以压榨后核桃粕为原料高效制备具有保护神经细胞氧化应激的改善记忆力活性肽(＜3kDa组分和序列YVLLPSPK)及其制备方法。

背景技术

随着全球人口老龄化进程加快，我国亦面临着剧烈的人口结构变化。据国家统计局公报显示，截止2018年底，我国60岁以上人口高达2.49亿，预计2050年将达到4.79亿。其中，约有17.9％患有严重的记忆障碍。并且随着年龄增长，记忆功能加速恶化，一般在初发阶段的3～9年内导致失语、失认、失用、视空间损害、执行功能障碍、人格障碍以及生活自理能力障碍等全面性功能障碍，更严重者为痴呆症。2019年9月世界卫生组织统计，全球5000万人正在被痴呆症所困扰，预计2030年将增加到8200万人，2050年将增加到1.52亿人。因痴呆症发病机理不明确，治疗手段受限，给患者、家庭和社会带来沉重的精神压力及经济负担。临床治疗显示，阿尔茨海默症初期(记忆功能障碍阶段)的治疗和干预是延缓痴呆症发生和发展的最佳时期。而食源性功能因子在膳食营养干预方面具有预防早、无毒无害、无思想负担等药物治疗无法比拟的优势。因此，寻找绿色、安全、高效且具有神经保护活性的天然分子进行膳食干预对预防或延缓记忆损伤具有重要意义。

大量研究表明，氧化应激、细胞自噬、线粒体功能障碍、细胞凋亡、神经递质的释放与传递以及神经炎症因子广泛参与了其致病过程。其中，氧化应激在记忆损伤、减退及丧失的发展过程中起着非常重要的作用。氧化应激是指由于细胞内源性抗氧化系统不能有效清除堆积的自由基，导致机体氧化和抗氧化系统失衡，ROS大量积累，促使细胞产生毒性，从而诱发一系列生理活动紊乱，最终引发多种疾病。由氧化应激诱导神经元内信号传导异常是导致记忆功能障碍的主要诱因。因此，改善神经细胞氧化应激是预防记忆减退及丧失，延缓痴呆症发生与发展的重要手段之一。

随着人们对食源性植物蛋白开发与利用关注的日益激增，利用酶工程技术制备活性肽进而探讨其所具有的生理功能已经成为科研工作者的研究热点。其中，植物源的抗氧化性受到越来越多学者的青睐。目前，利用压榨核桃粕制备功能性肽过程中，底物浓度通常为质量分数3％～13％，水解度为11％～27％，因此，限制了工业化高效生产及应用。同时，压榨后核桃粕中含有的油脂质量分数高达33％，严重降低了酶解效率。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有保护神经细胞氧化应激的改善记忆力活性肽组分(＜3kDa)和氨基酸序列明确的核桃活性肽YVLLPSPK(氨基酸序列明确的核桃活性肽YVLLPSPK是由改善记忆力活性肽组分(＜3kDa)通过Sephadex G-25凝胶渗透层析柱、Sephadex G-15凝胶渗透层析柱、反向-高效液相分离纯化，最后由高效液相电喷雾串联质谱鉴定得到，分子量为916.14Da)及其制备方法。

为提高活性肽制备效率，本发明以压榨后核桃粕(油脂质量分数为23.56％)为原料，采用螺杆挤压(单、双)和超声预处理，利用酶控制水解技术，增加底物浓度和水解度，通过分离纯化，制备具有保护神经细胞氧化应激的改善记忆力活性肽(＜3kDa)组分(以质量分数为9％～15％的脱脂核桃粕为底物，根据本发明的酶解条件进行酶解，所获得蛋白水解度最大，达到29.3％～42％)和氨基酸序列明确的核桃活性肽YVLLPSPK。本发明高效制备了保护神经细胞氧化应激的明显改善记忆力的核桃活性肽，为活性肽工业化高效制备以及产品开发提供依据和参考。