[发明专利]乙型肝炎感染患者或携带者外泌体miRNA分子标志物组合及筛查试剂盒

说明书

本发明公开了乙型肝炎感染患者或携带者外泌体miRNA分子标志物组合及筛查试剂盒，提取中国汉族乙型肝炎患者的血浆外泌体，筛选出乙型肝炎相关标志物hsa‑miR‑150‑5p、hsa‑miR‑1246、hsa‑miR‑5787以及hsa‑miR‑8069，为乙型肝炎患者、携带者和健康者提供早期筛查诊断和监测预后复发的标志物，从而预测乙型肝炎发生率，为治疗乙型肝炎患者和携带者提供新靶标。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及乙型肝炎感染患者或携带者外泌体miRNA分子标志物组合及筛查试剂盒。

背景技术

慢性乙型肝炎因乙型肝炎病毒(HBV)而引起的，乙型肝炎患者和HBV携带者是本病的主要传染源，主要传播路径可通过母婴、血和血液制品、破损的皮肤黏膜及性接触传播。

miRNA是一类非编码的小RNA分子，可通过转录抑制或诱导信使RNA的降解负向调节基因表达。很多报道表明，miRNA稳定存在于血浆、血清、唾液、尿液、精液等体液中，miRNA已成为各种疾病新颖、无创的监测指标，如肿瘤、心力衰竭、肝脏损伤等。

Xian研究表明，乙型肝炎患者以及携带者，血浆/血清的miRNA存在统计学差异，具体为miR-144-5p、hsa-miR-195-3p、miR-451a和miR-920。Zhang等也发现，与健康人群相比，慢性乙肝患者血清中有34种miRNA的表达发生改变，其中12种表达上调(其中包括了miR-122、miR-572、miR-575和miR-638)，22种表达下调(其中包括了miR-744)。其中，慢性乙肝患者中miR-122、miR-572和miR-638的表达水平明显高于非酒精性脂肪肝患者的表达水平，而miR-744的表达水平则明显低于非酒精性脂肪肝患者的表达水平。进一步统计学分析证实血清中miR-122、miR-572、miR-575、miR-638和miR-744用特异性地区分慢性乙肝、非酒精性脂肪肝及健康人群。Chen等进一步发现四个miRNA：let-7c、miR-23b、miR-122和miR-150在隐匿性HBV感染者血清中表达量明显高于健康人血清，可用于区分隐匿性HBV感染者和健康人群，从而为隐匿性HBV感染者提供敏感而精确的检测用生物标志物。此外，最新的研究还证实，血清miRNA表达谱还可以用于区分慢性乙型肝炎的不同中医证型，包括肝胆湿热证和肝肾阴虚证，其中肝胆湿热型乙肝患者血清miR-583和miR-663的表达水平会明显高于肝肾阴虚型乙肝患者。

外泌体是一类介导体内生物信息分子传递的纳米级小囊泡，外泌体能在体内运载和传递生物信息分子，在免疫调节、心血管疾病和肿瘤等生理病理过程中发挥着重要的功能。外泌体可由体内各种活细胞分泌，体液中含量很高，每微升血清中外泌体的数量可达3×10⁶，其携带的RNA、蛋白质和脂类等生物信息分子会随着疾病进展转归发生变化，是颇具临床诊断价值的循环标志物。而纯度高的、干扰少的外泌体及其内容物对于后续的临床诊断有着重要的实用价值。新型循环生物标志物外泌体(exosomes)由于能够在循环系统中传递和保护RNA逐渐成为了近几年的研究热点。有报道提出：如肠上皮细胞来源外泌体携带的MHC-Ⅱ类分子可经树突状细胞激活T细胞，在黏膜表面发挥免疫监督作用等。外泌体作为大分子信息物质的载体，在机体信号转导过程中发挥着重要的生理作用。而且其稳定的生物学特性、内容物多样性、非侵入性及检测迅速，使外泌体有望成为应用前景广阔的新型循环生物标志物，能够辅助诊断临床疾病。

综上所述，迫切需要一类准确、特异以及灵敏的miRNA，能够在乙型肝炎病毒(HBV)患者、携带者和健康者人群早期筛查、诊断和监测预后复发中发挥作用。

发明内容

本发明的首要目的在于提供乙型肝炎感染患者或携带者外泌体miRNA分子标志物组合及筛查试剂盒。

为达到上述目的，本发明所采取的技术方案是：

本发明第一方面，提供了hsa-miR-150-5p、hsa-miR-1246、hsa-miR-5787以及hsa-miR-8069作为乙型肝炎的标志物的应用。