[发明专利]用于KIF5B-RET融合基因检测的试剂组合物、试剂盒及检测系统

权利要求书

1.用于KIF5B-RET融合基因检测的试剂组合物，其特征在于，该试剂组合物包括crRNA、Cas12a酶和单链DNA荧光探针，其中，所述crRNA包括如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的试剂组合物，其特征在于，所述试剂组合物还包括引物对，所述引物对包括SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的试剂组合物，其特征在于，所述KIF5B-RET融合基因为KIF5Bexon15-RETexon12融合基因。

4.根据权利要求1所述的试剂组合物，其特征在于，所述单链DNA荧光探针包括如SEQID NO.4所示的核苷酸序列以及荧光基团，所述荧光基团包括FAM荧光基团、HEX荧光基团和TAMRA荧光基团中的至少一种。

5.一种用于KIF5B-RET融合基因检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒中含有权利要求1～4中任意一项所述的试剂组合物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还含有反应体系缓冲液、RNase抑制剂、Mg²⁺和水。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有以下含量的各组分：

20μL试剂中含有0.3～0.4μM的引物对、300～500nM的crRNA，14～15μL的Rehydrationbuffer、150～200nM的单链DNA荧光探针、5～10U的RNase抑制剂、2～3μL的NEBuffer2.1、0.3～0.6μL的醋酸镁、200～300nM的Cas12a酶。

8.权利要求1～4中任意一项所述的试剂组合物在制备用于KIF5B-RET融合基因检测的试剂盒中的用途。

9.一种用于KIF5B-RET融合基因检测的系统，其特征在于，该系统包括第一反应管、第二反应管、检测器和计算装置；其中，

所述第一反应管中设有RPA试剂，用于对待测样本的cDNA进行RPA扩增，得到扩增产物，其中，所述RPA试剂中含有RPA引物，所述RPA引物包括SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列；

所述第二反应管中设有Cas12a酶、单链DNA荧光探针和crRNA，用于在存在所述扩增产物时，进行Cas12a酶切反应，得到酶切产物，其中，crRNA包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，酶切反应时间为5-15分钟；

所述检测器设有紫外发光装置和荧光检测装置，所述紫外发光装置用于对所述酶切产物进行紫外光照射，所述荧光检测装置用于检测所述酶切产物在紫外光照射下的荧光值；

所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下的判别：

当所述荧光检测装置检测到所述酶切产物在紫外光照射下的荧光值为500～3000时，判定所述待测样本中存在KIF5B-RET融合基因。

10.根据权利要求9所述的系统，其特征在于，所述KIF5B-RET融合基因为KIF5Bexon15-RETexon12融合基因。