[发明专利]一种靶向MSLN的嵌合抗原受体及其应用

说明书

本发明提供了一种靶向MSLN的嵌合抗原受体及其应用，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域和信号转导结构域；所述抗原结合结构域包括抗Mesothelin单链抗体；所述铰链区为IgG4‑CH3。本发明通过向CAR分子中引入IgG4‑CH3铰链区，构建靶向MSLN的嵌合抗原受体，显著提高了CAR‑T细胞的体外扩增效率，在实体瘤治疗领域具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种靶向MSLN的嵌合抗原受体及其应用。

背景技术

近年来，随着肿瘤免疫学理论和临床技术的发展，嵌合抗原受体T细胞疗法(Chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成为最有发展前景的肿瘤免疫疗法之一。目前，CAR-T细胞疗法已经广泛应用于治疗B细胞恶性肿瘤，靶向CD19的CAR-T细胞是CAR-T疗法治疗B细胞恶性肿瘤的先驱，为治疗B细胞恶性肿瘤提供了有效方案。

尽管CAR-T细胞疗法已取得了惊人的疗效，但是仍然存在许多阻碍。例如，CAR-T细胞、尤其是CD4+CAR-T细胞的扩增效率还有待提高。在常规的体外培养体系中，CD8+T细胞相较于CD4+T细胞具有更明显的生长优势，体外培养主要获得CD8+T细胞，CD4+T细胞的比例极低。最近研究发现，CAR-T细胞中CD4+和CD8+T细胞的比例对于CAR-T细胞的抗肿瘤活性有很大影响，CAR-T细胞中CD4+T细胞的比例与CAR-T细胞的治疗效果呈正相关，因此为了获得大量的CD4+CAR-T细胞，需要首先分选出CD4+CAR-T细胞和CD8+CAR-T细胞，再通过不同的细胞因子组合分别扩增CD4+CAR-T细胞和CD8+CAR-T细胞，过程繁琐，成本巨大。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了一种靶向MSLN的嵌合抗原受体及其应用，所述嵌合抗原受体采用IgG4-CH3铰链区，显著提高了CD4+CAR-T细胞的体外扩增效率，增强了靶向MSLN的CAR-T细胞的杀伤作用。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域和信号转导结构域；

所述抗原结合结构域为抗Mesothelin单链抗体；

所述铰链区为IgG4-CH3。

本发明中，采用IgG4-CH3作为嵌合抗原受体的铰链区，显著提高了CD4+CAR-T细胞的体外扩增效率，增强了CAR-T对MSLN阳性肿瘤细胞的杀伤作用。

优选地，所述抗Mesothelin单链抗体包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；

SEQ ID NO:1：

SQVQLQQSGPGLVTPSQTLSLTCAISGDSVSSNSATWNWIRQSPSRGLEWLGRTYYRSKWYNDYAVSVKSRMSINPDTSKNQFSLQLNSVTPEDTAVYYCARGMMTYYYGMDVWGQGTTVTVSSGILGSGGGGSGGGGSGGGGSQPVLTQSSSLSASPGASASLTCTLRSGINVGPYRIYWYQQKPGSPPQYLLNYKSDSDKQQGSGVPSRFSGSKDASANAGVLLISGLRSEDEADYYCMIWHSSAAVFGGGTQLTVLSGILEQQG。

优选地，所述IgG4-CH3包括SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；

SEQ ID NO:2：