[发明专利]一种杉木内生真菌发酵滤液及其萃取物、制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种杉木内生真菌发酵滤液及其萃取物、制备方法和应用。本发明的Epicoccum dendrobii SMEL的发酵滤液能够显著抑制杉木炭疽菌孢子萌发，抑制杉木炭疽菌的附着胞发育；Epicoccum dendrobii SMEL发酵滤液的乙酸乙酯萃取物能明显抑制杉木炭疽菌的菌丝生长，显著抑制杉木炭疽菌的孢子萌发和附着胞发育；接种试验表明该乙酸乙酯萃取物显著了抑制杉木炭疽菌的致病力。

技术领域

本发明属于微生物农药领域，尤其涉及一种杉木内生真菌发酵滤液及其萃取物、制备方法和应用。

背景技术

杉木（Cunninghamia lanceolata）广泛种植于我国福建、江西、广西、四川、湖南、安徽、江苏等多个省（区），由于其干形挺直圆满、生长速度快、抗虫耐腐、经济价值高等特点，是我国重要的速生用材树种。杉木的造林面积和木材蓄积量均位列我国主要造林树种的第1位。由胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）引起的杉木炭疽病对我国杉木栽培区杉木生长造成了严重危害，病害轻微时杉木幼苗的针叶或嫩梢变褐枯萎，严重时会使杉木幼林成片枯黄、枯死，造成毁灭性的损害。杉木炭疽菌的营养方式是一种依赖于附着胞等介导的半活体营养方式。其侵染寄主植物的过程包括：（1）孢子萌发形成芽管菌丝；（2）芽管菌丝顶端分化产生附着胞；（3）附着胞分化产生侵染栓穿透植物表层细胞的细胞壁，并分化形成侵染菌丝侵染活体细胞；（4）侵染菌丝分化产生次生菌丝分泌降解酶类杀死寄主细胞。

目前杉木炭疽病的防治主要依赖于化学防治，该方法容易导致环境污染、误伤天敌、人畜生健康风险和病菌的抗药性等问题。生物防治具有绿色环保、防效持续性长、对人畜无害等优势，使其成为一种理想的植物病虫害防治途径。生物防治的一种应用方法是在自然环境中直接释放微生物，通过生防微生物与靶标病虫害的接触发挥生防作用；另一种方式是对生防微生代谢产生的抑菌物质进行提纯和应用，该方法具有防效高、受环境因素影响小等优势，具有广泛的开发和应用前景。Epicoccum dendrobii是一种杉木内生真菌，但目前关于该菌抑菌成分的提纯萃取及其萃取物的应用还缺乏研究。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一株杉木内生真菌Epicoccum dendrobii SMEL发酵滤液及其乙酸乙酯萃取物制备的方法，满足生物防治的使用需求。本发明的另一目的是提供上述杉木内生真菌发酵滤液和乙酸乙酯萃取物的应用。

为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种杉木内生真菌发酵滤液，其特征在于，其由杉木内生真菌经过发酵和过滤形成；所述的杉木内生真菌保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址为中国.武汉.武汉大学，其分类命名为Epicoccum dendrobii SMEL，此菌株代号为SMEL，其保藏编号是CCTCC No: M 2019895，保藏日期：2019年11月4日。

前述的杉木内生真菌发酵滤液的制备方法，包括如下步骤：将杉木内生真菌的菌丝块接种至培养基中震荡培养，收集发酵滤液；通过过滤得到无菌发酵滤液。

更具体地，将杉木内生真菌的菌丝块接种至无菌PD培养基中，28℃条件下，150rpm震荡培养5d；收集发酵滤液；过滤得到无菌发酵滤液。值得一提的是，并非必需以这样严苛的条件进行杉木内生真菌的发酵和过滤才能制得相应的发酵滤液，任何能制得杉木内生真菌发酵滤液的制备过程均属于本发明的保护范围。

本发明还提供杉木内生真菌发酵滤液的乙酸乙酯萃取物，由杉木内生真菌经过发酵、过滤形成无菌发酵滤液，通过乙酸乙酯对无菌发酵滤液进行萃取以得到杉木内生真菌发酵滤液的乙酸乙酯萃取物。