[发明专利]龙舌兰麻cpSSR标记引物及其应用

权利要求书

1.一种龙舌兰麻cpSSR标记引物组，其特征在于，所述引物组由20对多态性引物构成，引物的核苷酸序列如下：

cpSSR21正向引物如序列表中SEQ ID NO.1所示；

cpSSR21反向引物如序列表中SEQ ID NO.2所示；

cpSSR22正向引物如序列表中SEQ ID NO.3所示；

cpSSR22反向引物如序列表中SEQ ID NO.4所示；

cpSSR23正向引物如序列表中SEQ ID NO.5所示；

cpSSR23反向引物如序列表中SEQ ID NO.6所示；

cpSSR24正向引物如序列表中SEQ ID NO.7所示；

cpSSR24反向引物如序列表中SEQ ID NO.8所示；

cpSSR25正向引物如序列表中SEQ ID NO.9所示；

cpSSR25反向引物如序列表中SEQ ID NO.10所示；

cpSSR26正向引物如序列表中SEQ ID NO.11所示；

cpSSR26反向引物如序列表中SEQ ID NO.12所示；

cpSSR27正向引物如序列表中SEQ ID NO.13所示；

cpSSR27反向引物如序列表中SEQ ID NO.14所示；

cpSSR28正向引物如序列表中SEQ ID NO.15所示；

cpSSR28反向引物如序列表中SEQ ID NO.16所示；

cpSSR29正向引物如序列表中SEQ ID NO.17所示；

cpSSR29反向引物如序列表中SEQ ID NO.18所示；

cpSSR30正向引物如序列表中SEQ ID NO.19所示；

cpSSR30反向引物如序列表中SEQ ID NO.20所示；

cpSSR31正向引物如序列表中SEQ ID NO.21所示；

cpSSR31反向引物如序列表中SEQ ID NO.22所示；

cpSSR32正向引物如序列表中SEQ ID NO.23所示；

cpSSR32反向引物如序列表中SEQ ID NO.24所示；

cpSSR33正向引物如序列表中SEQ ID NO.25所示；

cpSSR33反向引物如序列表中SEQ ID NO.26所示；

cpSSR34正向引物如序列表中SEQ ID NO.27所示；

cpSSR34反向引物如序列表中SEQ ID NO.28所示；

cpSSR35正向引物如序列表中SEQ ID NO.29所示；

cpSSR35反向引物如序列表中SEQ ID NO.30所示；

cpSSR36正向引物如序列表中SEQ ID NO.31所示；

cpSSR36反向引物如序列表中SEQ ID NO.32所示；

cpSSR37正向引物如序列表中SEQ ID NO.33所示；

cpSSR37反向引物如序列表中SEQ ID NO.34所示；

cpSSR38正向引物如序列表中SEQ ID NO.35所示；

cpSSR38反向引物如序列表中SEQ ID NO.36所示；

cpSSR39正向引物如序列表中SEQ ID NO.37所示；

cpSSR39反向引物如序列表中SEQ ID NO.38所示；

cpSSR40正向引物如序列表中SEQ ID NO.39所示；

cpSSR40反向引物如序列表中SEQ ID NO.40所示。

2.如权利要求1所述的龙舌兰麻cpSSR标记引物组在龙舌兰麻种质资源细胞质遗传多样性分析及亲缘关系研究上的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述遗传多样性分析的具体步骤如下：

S1、基因组DNA提取：采用CTAB法提取龙舌兰麻高质量总基因组DNA，DNA的质量和浓度采用紫外分光核酸测定仪测定，并用1%的琼脂糖凝胶电泳检测确认；

S2、cpSSR-PCR反应；

cpSSR-PCR反应体系：扩增反应总体积为50 μL，包括 浓度为50 ng μL^-1 的基因组DNA3 μL 、 2×Taq PCR Master Mix 25 μL、浓度为 2 μmol L^-1 的正向引物2.5 μL、 浓度为2μmol L^-1的反向引物2.5 μL 、 ddH₂O 17 μL；

cpSSR-PCR反应程序： 95℃预变性5 min；95℃变性35 s，不同cpSSR引物退火40s，72℃延伸45 s，32个循环；72℃延伸10min；

S3、PCR产物sanger测序：利用ABI3730测序仪开展PCR产物的sanger测序；

S4、数据分析：用Bioedit软件研判sanger测序的图峰，将龙舌兰麻多样本同一SSR标记位点的测序结果进行多重比对；采用PowerMarker 3.25软件计算基于45份龙舌兰麻材料的各引物对的等位基因数、基因多样性和多态性信息量。