[发明专利]猪δ冠状病毒抗体、含有猪δ冠状病毒抗体的试剂盒及应用

说明书

本发明提供了抗体，其Ig单体的基本单位构成，该Ig单体的重链可变区如SEQ ID NO.1所示，轻链可变区如SEQ ID NO.2所示；或该Ig单体的重链可变区如SEQ ID NO.3所示，轻链可变区如SEQ ID NO.4所示。上述两种抗体组成的猪δ冠状病毒胶体金检测试纸条能对猪δ冠状病毒抗原进行检测，其能与猪δ冠状病毒结合，敏感性仅低于PCR检测。上述抗体的重链可变区和轻链可变区还可用于制备单链抗体，该单链抗体可用于不同PDCoV毒株的反应性评价。

技术领域

本发明属于免疫诊断领域，具体涉及两种猪δ冠状病毒抗体，以及含猪δ冠状病毒抗体的试剂盒和应用。

背景技术

猪德尔塔(δ)冠状病毒(Porcine deltacoronavirus，PDCoV)是尼多目、冠状病毒科、冠状病毒亚科、δ冠状病毒属成员，是近年来新发现的一种可引起母猪和哺乳仔猪呕吐、水样腹泻、脱水及死亡的重要病原体。该病毒于2012年在中国香港首次被报道，约10％的猪粪便样品呈PDCoV阳性；美国于2014年2月在腹泻仔猪和母猪的粪便中首次检到，并逐步蔓延至美国各州；之后韩国、加拿大、中国、老挝、泰国和日本等多国均有报道。对国内报道的流行情况进行统计，来自河南、陕西、广东、湖北、湖南、浙江、江西、安徽、河北、黑龙江、江苏、山东、上海、天津等省市的3792份粪便或小肠样品中检出573份PDCoV阳性样品，阳性率为15.11％。综上所述，从目前PDCoV的感染情况和流行病学调查结果可以发现PDCoV的感染呈现全球流行的趋势，对世界养猪业造成了巨大的经济损失，对该病毒的防控势在必行。

目前，检测猪δ冠状病毒的方法主要有病毒分离、电镜(EM)、RT-PCR、荧光定量PCR等，其中，病毒分离较有难度，电镜虽然可以直接观察到病毒颗粒的形态和大小，PCR方法能检测病毒的核酸，但这些方法主要依赖于实验室检测，不仅操作过程复杂、耗时，还需要专业的技术人员、昂贵的仪器。因此，简便、快速、灵敏、易保存的诊断产品是解决猪δ冠状病毒诊断难题的关键，特别是能针对不同猪δ冠状病毒诊断均具有良好敏感性是其中的关键性问题。

猪轮状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒及猪δ冠状病毒均为引起猪腹泻的重要病原，临床症状类似，临床上根据临床症状很难区分这四种病原的感染。各种年龄段的猪均易感猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒，哺乳仔猪、架子猪或育肥猪的发病率可达100％、尤其对哺乳仔猪的危害最为严重。因此，临床上有必要对这四种临床症状相似的疾病的病原进行快速的鉴别检测。

发明内容

为解决现有技术的缺点和不足，本发明提供了一对猪δ冠状病毒单克隆抗体，以及含单克隆抗体的试剂盒及其应用。

本发明涉及一种抗体，其由Ig单体的基本单位构成，所述Ig单体分子含有四条异源性多肽链，其中，分子量较大的两条链为重链，分子量较小的两条链为轻链，同一所述Ig分子中的所述两条重链之间的氨基酸组成完全相同，同一所述Ig分子中的所述两条轻链之间的氨基酸组成完全相同，其中，每一条所述重链的N端上具有重链可变区，所述重链可变区如SEQ ID NO.1所示，每一条所述轻链的N端上具有轻链可变区，所述轻链可变区如SEQID NO.2所示。

本发明抗体的重链可变区SEQ ID NO.1、轻链可变区SEQ ID NO.2能与不同猪δ冠状病毒具有良好的结合能力，IFA效价不低于1∶12800。

作为本发明的一种实施方式，所述抗体为IgA、IgD、IgE、IgG、或IgM。

本发明还涉及一种特异性结合猪δ冠状病毒的抗体或其片段，其中，所述抗体或其片段的重链可变区如SEQ ID No.1所示或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体，以及所述抗体或其片段轻链可变区如SEQ ID No.2所示或其经过一个或多个氨基酸添加、删除、替换或修饰保守性突变获得的保守性变异体。