[发明专利]一株产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆激酶产品的方法

说明书

本发明属于生物工程技术领域，提供了一株产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆激酶产品的方法，所涉及的产纳豆激酶的菌株，经16SrDNA鉴定为一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，菌株代码为YJY20‑05，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.20017。该菌株应用于纳豆激酶液体发酵中酶活较原始菌株发酵水平提高1倍、时间缩短1倍，纳豆激酶提取纯化后,先制成微胶囊后与卵磷脂复合制备纳豆激酶片，可获得纳豆激酶含量为2000FU/片、卵磷脂含量0.3g/片的纳豆激酶片剂，既保证了纳豆激酶的活性又强化了预防和治疗血栓性疾病的功能。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，提供了一株产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆激酶产品的方法。

背景技术

血栓性疾病是一般由血液中的血小板、纤维蛋白、白细胞等物质粘联而形成的血栓，随着血栓的不断增大，造成了血管阻塞甚至封闭，使机体的一些器官因缺血而引发功能性障碍的各种疾病。血栓性疾病的致残和致死的概率都较高，是一种严重危害人类健康和生命的疾病。据报道，中国血栓性疾病的患者已经达到1000万以上，并且每年新增的患者大约有150～200万人，每年都有超过300万人进行血栓治疗。伴随着老龄化社会的到来，估计患病人数会有进一步的增加，所以血栓性疾病已经是对我们健康威胁的主要疾病之一。

纳豆激酶(nattokinase，NK)是由纳豆枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis natto)产生的一种具有纤溶活性的丝氨酸蛋白酶，易溶于水，固态呈淡黄色或白色，无二硫键，一般为单链多肽结构。纳豆激酶的脱氧核糖核酸序列由275个氨基酸残基构成，相对分子质量一般为28000u。该酶N末端为丙氨酸，等电点为8.6±0.3。在室温下，酶活性在pH值6.0～12.0的范围内具有很强的纤维蛋白水解能力，酶反应的最适pH值一般为8，酸性和强碱性条件下会迅速失活。其酶活力不易受反复冻融影响，温度达50℃以上时酶活性会逐渐丧失，超过60℃酶迅速失活，其最适温度为45℃。

纳豆激酶具有良好的溶解血栓的功效，与传统的溶栓药物链激酶、尿激酶相比具有药理作用直接且多元化、体内半衰期长、分子量相对较小可直接通过胃肠系统被人体吸收、安全性高、价格便宜等诸多优点。Kim J.Y.et al.Effects of nattokinase on bloodpressure:a randomized,controlledtrial.研究表明20～80岁高血压患者口服纳豆激酶胶囊(2000FU/天)8周后，舒张压和收缩压均较对照组(服用安慰剂)明显降低。然而目前国内的纳豆激酶产品活性普遍比较低,筛选具有高活力纳豆激酶生产能力的菌株及制备高活性的纳豆激酶活性产品,作为预防和治疗血栓性疾病具有重要意义。

发明内容

本发明针对上述技术存在的不足，提供一株产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆激酶产品的方法，所涉及的产纳豆激酶的菌株，经16SrDNA鉴定为一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，菌株代码为YJY20-05，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.20017。该菌株应用于纳豆激酶液体发酵中酶活较原始菌株发酵水平提高1倍、时间缩短1倍，纳豆激酶提取纯化后,先制成微胶囊后与卵磷脂复合制备纳豆激酶片，可获得纳豆激酶含量为2000FU/片、卵磷脂含量0.3g/片的纳豆激酶片剂，既保证了纳豆激酶的活性又强化了预防和治疗血栓性疾病的功能。

本发明提供的具体技术方案是：

本发明首先提供了一株新的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，该菌株来源与市场上的原始菌株，其具体获得过程如下：