[发明专利]一种黄草乌胚状体的诱导培养方法

权利要求书

1.一种黄草乌胚状体的诱导培养方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）珠芽选择：选择黄草乌生长健壮的植株，剪取叶腋间幼嫩的珠芽作为外植体；

（2）珠芽消毒：将步骤（1）选取的黄草乌珠芽在体积浓度75%的乙醇溶液中消毒20～60s，用无菌水清洗4～6次，然后放入质量浓度0.1%的HgCl₂溶液中消毒10～15min，再用无菌水清洗4～6次，用无菌纸吸干水分；

（3）愈伤组织诱导：将步骤（2）消毒后的黄草乌珠芽接入固体培养基中，在培养温度为20～25℃、每天光照6～12h、光照强度2500～3500lx的条件下进行培养，培养15～25d，获得愈伤组织；

所述固体培养基配方为：MS培养基中添加2,4-二氯苯氧乙酸1.0～2.0mg/L、激动素0.1～0.5mg/L、聚乙烯吡咯烷酮1.0～3.0g/L、琼脂5.0～6.5g/L、蔗糖20～40g/L，培养基pH值为5.8～6.6；

（4）胚状体诱导：从步骤（3）愈伤组织中选取颜色为带绿色的鹅黄色、分裂旺盛的胚性愈伤组织，接入固体诱导培养基中，在培养温度为20～25℃、每天光照6～12h、光照强度2500～3500lx的条件下诱导产生胚状体；

所述固体诱导培养基配方为：MS培养基中添加2,4-二氯苯氧乙酸1.5～1.8mg/L、激动素0.3～0.5 mg/L、聚乙烯吡咯烷酮1.0～3.0g/L、琼脂5.0～6.5g/L、蔗糖20～40g/L，培养基pH值为5.8～6.0；

（5）胚状体培养：选取步骤（4）中获得的带绿色的胚状体，接入固体扩大培养基中，在培养温度为20～25℃、每天光照6～12h、光照强度2500～3500lx的条件下扩大培养胚状体；

所述固体扩大培养基配方为：MS培养基中添加2,4-二氯苯氧乙酸1.0～1.5mg/L、激动素0.1～0.5mg/L、聚乙烯吡咯烷酮1.0～3.0g/L、琼脂5.0～6.5g/L、蔗糖20～40g/L，培养基pH值为5.8～6.0。