[发明专利]蛹虫草凝集素基因及其制备方法、重组表达载体、菌株、及蛹虫草凝集素的制备方法和应用

说明书

本发明公开一种蛹虫草凝集素基因及其制备方法、重组表达载体、菌株、及蛹虫草凝集素的制备方法和应用，其中，所述蛹虫草凝集素基因CMA用于编码蛹虫草凝集素，所述蛹虫草凝集素基因CMA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明提供的蛹虫草凝集素基因CMA，为从蛹虫草基因组中克隆出的部分基因片段，并确定了其为蛹虫草凝集素编码基因；此外，该蛹虫草凝集素基因CMA可以编码出一种蛹虫草凝集素，该蛹虫草凝集素能特异性凝集大鼠的红细胞，还对糖结构的识别和结合具有高度特异性，同时能特异性的识别、结合并激活巨噬细胞。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种蛹虫草凝集素基因CMA及其制备方法、以及重组表达载体、重组表达菌株、蛹虫草凝集素的制备方法和应用。

背景技术

凝集素是一类可选择性识别与结合特定糖结构的非免疫原性球蛋白。凝集素在自然界中分布较为广泛，在细菌、真菌、藻类、哺乳动物以及植物中均鉴定到凝集素的存在。大型真菌是较为珍贵的凝集素资源库，很多真菌来源的凝集素被报道对糖的识别与结合具有高度的特异性与选择性，并已被广泛应用于糖生物学研究中。另一方面，真菌凝集素具有广泛的生物活性，例如抗菌、抗肿瘤以及免疫调节等，作为一类重要的潜在试剂/药物受到研究者的广泛关注。

蛹虫草属于一种重要的食药两用大型真菌，含有多肽、多糖、虫草素、虫草酸等多种活性成分。这些活性成分赋予蛹虫草一些重要的药理活性，如抗菌、抑炎、调节免疫以及抗肿瘤等。然而，目前关于蛹虫草凝集素基因特征以及功能的研究还较少。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种蛹虫草凝集素基因及其制备方法、重组表达载体、菌株、及蛹虫草凝集素的制备方法和应用，旨在提供一种蛹虫草凝集素基因，该基因能编码具有特异性功能的蛹虫草凝集素。

为实现上述目的，本发明提出一种蛹虫草凝集素基因CMA，用于编码蛹虫草凝集素，所述蛹虫草凝集素基因CMA的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本发明还提出一种蛹虫草凝集素基因CMA的制备方法，包括以下步骤：

从蛹虫草中提取总RNA；

将提取到的所述总RNA进行反转录，获得cDNA；

以所述cDNA为模板，用特异性引物对进行PCR扩增，得到蛹虫草凝集素基因CMA；

其中，所述特异性引物包括第一引物对和第二引物对中任意一种，所述第一引物对包括正向引物PF1和反向引物PR1，所述第二引物对包括正向引物PF2和反向引物PR2；

所述第一引物对的核苷酸序列为：

正向引物PF1：5-’ATGGAGATCGCAGAACAGAACGTC’-3，

反向引物PR1：5-’TTACACGGTAATGATCTTATAGTCGCC’-3；

所述第二引物对的核苷酸序列为：

正向引物PF2：5-’ATGGAGATCGCAGAACAGAACGTCGGT’-3，

反向引物PR2：5-’TTACACGGTAATGATCTTATAGTCGCCTT’-3。

本发明还提出一种重组表达载体，包括如上所述的蛹虫草凝集素基因CMA。

可选地，所述重组表达载体的表达载体为质粒pGEX-6P-1。

本发明还提出一种菌株，包括如上所述的蛹虫草凝集素基因CMA。

可选地，所述菌株的宿主细胞为BL21(DE3)。

本发明还提出一种蛹虫草凝集素的制备方法，培养如上所述的菌株，得到蛹虫草凝集素。