[发明专利]银纳米粒/硫量子点双掺杂MOF复合物比率荧光外泌体适体探针的制备方法

权利要求书

1.一种银纳米粒/硫量子点双掺杂MOF复合物比率荧光外泌体适体探针的制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：

(1)制备锌掺杂硫量子点Zn-SQDs：在搅拌下向75mL二次蒸馏水中加入1.5g升华硫，3mL聚乙二醇PEG-400和4g氢氧化钠，形成均质混合液；转入含100mL聚四氟乙烯内衬的微型高压反应釜中，在70℃下搅拌反应5h；冷却产物溶液至室温，取5mL产物溶液，在搅拌下加入5mL浓度为5wt％的硝酸锌水溶液，继续搅拌30min，制得Zn-SQDs水分散液；

(2)制备银纳米粒AgNPs：在搅拌下向50mL二次蒸馏水中加入50mg硫辛酸粉末，加入0.3mL浓度为1mol L^-1的硼氢化钠水溶液，搅拌反应30min，形成均质混合液；加入0.3mL浓度为0.1mol L^-1的硝酸银，再加入0.8mL浓度为1mol L^-1的硼氢化钠水溶液，继续搅拌2h，制得AgNPs水分散液；

(3)制备AgNPs和Zn-SQDs双掺杂的MOF复合物AgNPs/Zn-SQDs/MOF：在搅拌下向10mL的2-甲基咪唑甲醇溶液中加入1mL浓度为1～10mg mL^-1的AgNPs水分散液，搅拌10min形成混合液；再加入10mL六水合硝酸锌水溶液，搅拌30min形成沉淀物，用乙醇和蒸馏水洗涤三次，在5000rpm转速下离心10min，制得AgNPs/MOF复合物水分散液；在搅拌下加入1mL浓度为1～10mg mL^-1的Zn-SQDs水分散液，搅拌反应2h；产物经离心得沉淀物，沉淀物经洗涤和干燥制得AgNPs/Zn-SQDs/MOF水分散液；

(4)制备比率荧光外泌体适体探针：配制浓度为1～10μmol L^-1的CD63跨膜蛋白对应单链DNA适体Aptamer的磷酸盐水PBS缓冲液，在搅拌下加入多巴胺DA，在37℃下孵育30～120min，DA浓度为0.1～1μmol L^-1，形成Aptamer/DA复合物；在搅拌下将此复合物加入AgNPs/Zn-SQDs/MOF水分散液中，在37℃下孵育1～6h，制得AgNPs/Zn-SQDs/MOF/Aptamer/DA纳米复合物水分散液；加入从乳腺癌MCF-7细胞提取的外泌体的PBS缓冲液，形成均质混合液；测量混合液的荧光发射光谱，拟合荧光峰强度比值I_Zn-SQDs/I_AgNPs与外泌体浓度之间的线性关系，构建用于外泌体检测的比率荧光探针；外泌体浓度的线性检测范围为5×10¹～1×10⁶particles μL^–1，检测限为10～50particles μL^–1。