[发明专利]从盐地碱蓬中分离精制多种甜菜红素的方法

权利要求书

1.一种从盐地碱蓬中分离精制多种甜菜红素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将新鲜的盐地碱蓬茎叶洗净晾干，加入酸性水溶液，在室温下浸提72小时，将浸提液用酸性水溶液洗脱，得到组分A0；

（2）将所述组分A0通过中压制备液相色谱分离，得到馏分B1和馏分B2，所述步骤（2）中的中压制备液相色谱(Agilent Technologies 971-FP Flash Purification System)，使用MPLC-C18柱(MPLCBuchiC620，色谱柱ODS (YamazenODS-C18 500×80mm，40-60μm))，温度为室温，以0.1% (v/v) 乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱，洗脱梯度为0% 5min，0%-55%45min，100% 20min；流速为100 mL•min^-1；

（3）将所述馏分B1通过凝胶色谱分离，洗脱后得到馏分B1-C1；

（4）将所述馏分B1-C1通过中压制备液相色谱分离、凝胶色谱分离和高压制备液相色谱纯化，即可得到第一种甜菜红素，苋菜红苷 (amaranthin)，所述步骤（4）中的中压制备液相色谱 (Agilent Technologies 971-FP Flash Purification System)，使用MPLC-C18柱(MPLCBuchiC620,色谱柱ODS (YamazenODS-C18 20×500mm,4-6μm))，温度为室温，以0.1%(v/v) 乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱，洗脱梯度为0% 5min，0%-55% 45min，100%20min；流速为100 mL•min^-1；所述步骤（4）中的高压制备液相色谱 (Pre-HPLC Gilson281), 色谱柱为 ODS (Luna C18 100×30mm, 5μm)，温度为室温，以0.1% (v/v) 乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱，洗脱梯度为1%~10% 12min，100% 2min；流速为25 mL•min^-1；

（5）将所述馏分B2通过中压制备液相色谱分离得到馏分B2-C1和馏分B2-C2，所述步骤（5）中的中压制备液相色谱(Agilent Technologies 971-FP Flash PurificationSystem)，使用MPLC-C18柱 (MPLCBuchiC620, 色谱柱ODS (YamazenODS-C18 20×500mm,40-60μm))，温度为室温，以0.1% (v/v) 乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱，洗脱梯度为0%5min，0%-55% 45min，100% 20min；流速为100 mL•min^-1；

（6）将所述馏分B2-C1通过高压制备液相色谱分离得到馏分B2-C1-D1和B2-C1-D2，所述步骤（6）中的高压制备液相色谱 (Pre-HPLC Gilson 281), 色谱柱为 ODS (Luna C18 100×30mm, 5μm)，温度为室温，以含 0.1% (v/v) 乙腈溶液作为流动相进行洗脱，洗脱梯度为0% 5min，0%-25% 25min，90% 10min；流速为30 mL•min^-1；

（7）将所述馏分B2-C1-D1通过凝胶色谱分离和高压制备液相色谱纯化，即可得到第二种甜菜红素，甜菜红苷 (betanidin)；

（8）将所述馏分B2-C1-D2通过高压制备液相色谱纯化，即可得到第三种甜菜红素，鸡冠花素 II (celosianin II)；

（9）将所述馏分B2-C2通过高压制备液相色谱纯化，即可得到第四种甜菜红素，6’-O-丙二酰-鸡冠花素II (6'-O-malonyl-celosianin II)，

所述凝胶色谱分离中使用的凝胶为Sephadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶，采用50%(v/v)甲醇 和0.5%(v/v)三氟乙酸（TFA） 洗脱；

所述步骤（7）、步骤（8）和步骤（9）中的高压制备液相色谱(Pre-HPLC Gilson 281), 色谱柱为 ODS (Luna C18 100×30mm, 5μm)，温度为室温，以含0.1% (v/v) 乙腈溶液作为流动相进行梯度洗脱，洗脱梯度为10%~20% 12min，100% 2min；流速为25 mL•min^-1。

2.根据权利要求1所述的从盐地碱蓬中分离精制多种甜菜红素的方法，其特征在于，

所述步骤（1）中浸提预处理时，所述盐地碱蓬茎叶与所述酸性水溶液的料液比为1:3，所述酸性水溶液的pH值为5。