[发明专利]一种筛选康艾注射液抗肿瘤药效物质基础的方法

权利要求书

1.一种筛选康艾注射液抗肿瘤药效物质基础的方法，其特征在于，包括如下步骤：

采用高效液相色谱对康艾注射液进行分离，获取所述康艾注射液的组分；然后测定所述康艾注射液的组分对肿瘤细胞的增殖抑制率；

所述高效液相色谱法的条件为：

流动相：A相为0.05wt％甲酸-水，B相为甲醇；

线性洗脱梯度：0-35min，A：B为85-95wt％：15-5wt％→54-64wt％：46-36wt％；

35-55min，A：B为54-64wt％：46-36wt％→0-5wt％：100-95wt％；55-65min，

A：B为0-5wt％：100-95wt％→0-5wt％：100-95wt％；

流速：11-14mL/min；

柱温：25-35℃；

DAD检测器波长：全波长；

进样量：1-3mL；

从第3min收集第一个组分开始，每3min收集流分作为一个组分。

2.根据权利要求1所述的筛选康艾注射液抗肿瘤药效物质基础的方法，其特征在于，所述线性洗脱梯度为：0-35min，A：B为90wt％：10wt％→59wt％：41wt％；35-55min，A：B为59wt％：41wt％→0wt％：100wt％；55-65min，A：B为0wt％：100wt％→0wt％：100wt％。

3.根据权利要求1或2所述的筛选康艾注射液抗肿瘤药效物质基础的方法，其特征在于，将康艾注射液按照体积比50:(4-5)比例浓缩，浓缩液进行离心，所得上清液采用高效液相色谱分离。

4.根据权利要求1或2所述的筛选康艾注射液抗肿瘤药效物质基础的方法，其特征在于，还包括测定康艾注射液和康艾注射液的单体成分对肿瘤细胞的增殖抑制率。

5.根据权利要求4所述的筛选康艾注射液抗肿瘤药效物质基础的方法，其特征在于，所述康艾注射液的单体成分包括苦参素单体成分、人参单体成分和黄芪单体成分中的一种或以上。

6.根据权利要求5所述的筛选康艾注射液抗肿瘤药效物质基础的方法，其特征在于，所述苦参素单体成分选自氧化苦参碱和氧化槐果碱；

所述人参单体成分选自人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rc、人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、人参皂苷Rd、人参皂苷Rf和人参皂苷Ro；

所述黄芪单体成分选自毛蕊异黄酮、黄芪甲苷、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-b-D-吡喃葡萄糖苷、芒柄花苷、黄芪皂苷1、黄芪皂苷2、环黄芪醇和芒柄花素。

7.根据权利要求1-6任一项所述的筛选康艾注射液抗肿瘤药效物质基础的方法，其特征在于，采用MTT法测定所述康艾注射液、康艾注射液的组分、康艾注射液的单体成分对肿瘤细胞的增殖抑制率，包括：

肿瘤细胞消化处理后接种于培养基中，培养24-48h后吸弃原培养基，康艾注射液、康艾注射液的组分或康艾注射液的单体成分经培养基稀释后得到的药液在37℃，5％CO₂下孵育细胞24-48h，然后吸弃药液，加入MTT溶液，避光孵育后，吸去上清液，加入DMSO，振荡混匀，采用酶标仪在580nm波长条件下测定吸光度，计算不同浓度康艾注射液、康艾注射液的组分或康艾注射液的单体成分孵育后的细胞存活率，从而计算所述康艾注射液、康艾注射液的组分或康艾注射液的单体成分对肿瘤细胞的增殖抑制率；

所述细胞存活率的计算公式为：细胞存活率(％)＝给药组吸光度/阴性对照组吸光度×100％；

所述增殖抑制率的计算公式为：增殖抑制率(％)＝1-细胞存活率(％)。

8.根据权利要求7所述的筛选康艾注射液抗肿瘤药效物质基础的方法，其特征在于，所述增殖抑制率＞15％时，康艾注射液的组分或康艾注射液的单体成分是康艾注射液的抗肿瘤药效物质。