[发明专利]抗体、其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种抗体、其制备方法和应用，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。该抗体的灵敏度和特异性均能满足检测需求，且生产成本低，可大规模应用于检测试剂盒，对人疾病早期的快速诊断具有重要意义。

技术领域

本发明涉及一种抗体、其制备方法和应用，属于生物技术领域。

背景技术

人体内的纤维蛋白原在纤溶系统激活后产生的纤溶酶的作用下，降解形成Bβ1～42肽键，A、B、C、H极附属物以及X、Y、D、E碎片，称为纤维蛋白原降解产物（FgDP）。

人体内的纤维蛋白原α（A）链和β（B）链在凝血酶的作用下，先后释放出纤维蛋白肽A（FPA）和肽B（FPB），剩余部分分别称为纤维蛋白Ⅰ（Fb-Ⅰ）和纤维蛋白Ⅱ（Fb-Ⅱ）。在纤溶酶的作用下，Fb-Ⅰ被降解成Bβ1～42肽键，A、B、C、H极附属物以及X'、Y'、D、E'碎片，Fb-Ⅱ被降解成Bβ15～42肽键，A、B、C、H极附属物以及X'、Y'、D、E'碎片；同时Fb-Ⅰ和Fb-Ⅱ可自行聚合成可溶性纤维蛋白单体聚合物（sFMC）。在FXⅢa和Ca2⁺作用下，Fb-Ⅰ和Fb-Ⅱ形成交联纤维蛋白；在纤溶酶作用下，交联的纤维蛋白除降解产生碎片X'、Y'、D和E'外，还生成D-二聚体（D-Dimer，DD）等。

D-二聚体反映受检者体内凝血-纤溶系统活化状况，与多种疾病密切相关。在临床检测过程中，它们受到诸多因素的影响，常会造成假阳性或假阴性的结果，而降低临床应用的敏感性和特异性，直接影响临床的诊断。

因此，一种高效的检测D-二聚体的抗体对于疾病早期的快速诊断具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗体、其制备方法和应用，其灵敏度和特异性均能满足检测需求，对人疾病早期的快速诊断具有重要意义。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：一种抗人D-二聚体抗体，所述抗人D-二聚体抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述抗人D-二聚体抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述抗体作用的抗原为人D-二聚体。

进一步地，所述重链可变区具有三个高变区：HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

进一步地，所述轻链可变区具有三个高变区：LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

本发明还提供一种制备所述的抗人D-二聚体抗体的方法，所述制备方法包括以下步骤：

S1、以人D-二聚体来使小鼠产生免疫反应，得到免疫小鼠；

S2、将所述免疫小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞进行融合，得到杂交瘤细胞；

S3、对所述杂交瘤细胞进行筛选分离，得到抗人D-二聚体抗体的杂交瘤细胞株；

或者，包括以下步骤：

S1’、提供携带编码所述抗人D-二聚体抗体的DNA的宿主细胞；

S2’、逆转录所述宿主细胞的总RNA，得到cDNA；

S3’、以所述cDNA为模板，通过PCR扩增得到所述抗人D-二聚体抗体的重链可变区和轻链可变区的DNA序列；

S4’、通过DNA重组得到插入了所述重链可变区和轻链可变区的DNA序列的表达载体；

S5’、通过基因转染将所述表达载体转染CHO细胞。