[发明专利]一种胶体金标记方法及其产品

说明书

本发明公开了一种胶体金标记方法，包括以下步骤：制备待用胶体金溶液并调节pH值满足：pI+0.4pHpI+0.6，获得标准胶体金溶液；向标准胶体金溶液中添加表面活性剂；后添加待标记蛋白或待标记抗体的溶液；再添加封闭剂，得到包含有待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液；将包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液离心，弃去上清液，取沉淀物；将沉淀物经胶体金复溶液复溶后得到金标复合物溶液；筛选金标复合物溶液的最佳稀释倍数；将所述金标复合物溶液按照最佳稀释倍数进行稀释，得到金标复合物稀释液，采用所述金标复合物稀释液制备金垫；本发明所提供的方法减少了由胶体金粒径大小、pH等因素而对胶体金标记效率产生的不利影响。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种胶体金标记方法及其产品。

背景技术

胶体金标记技术是指以胶体金作为显色示踪粒子的标记技术。胶体金对待标记蛋白或待标记抗体的吸附主要取决于其pH值。其中，当胶体金的pH值接近待标记蛋白(或待标记抗体)的等电点(pI)或略偏碱性的条件下，胶体金和待标记蛋白容易形成牢固的结合物；当胶体金的pH值低于待标记蛋白的等电点时，则胶体金和待标记蛋白会发生聚集而失去结合能力；当胶体金的pH值远大于待标记蛋白的等电点时，则胶体金和待标记蛋白的结合能力变弱，胶体金和待标记蛋白均呈游离状态，难以形成金标复合物。

此外，由于胶体金颗粒粒径的不一致，在标记蛋白的时候，即使将不同粒径的胶体金溶液调整至相同的pH条件下，但是由于各胶体金颗粒的粒径差异太大，则会出现以下情况：一部分胶体金在标记蛋白后可以很稳定；一部分胶体金在标记蛋白后，蛋白构象因为胶体金粒径的影响而产生翻转等变化，使得胶体金颗粒与待标记蛋白相互吸附聚集，导致标记蛋白的胶体金溶液状态很不稳定，则标记蛋白的胶体金溶液快速会逐步变色变暗甚至产生沉淀，最终导致胶体金标记失败。此外，在制备待标记蛋白溶液时，需要添加一些蛋白保护剂来提高待标记蛋白的稳定性及活性。蛋白保护剂常为离子型化合物，其产生的电荷作用会给胶体金溶液的稳定性带来很大程度的负面影响。具体而言，这类蛋白保护剂在胶体金溶液中会破坏胶体金胶粒表面的水化膜、双离子层结构，导致胶体金溶液状态很不稳定。

鉴于上述问题，为保证胶体金标记效果，需要不断的优化和摸索标记工艺，以保证最终产品的质量。

因此，亟需研制一种胶体金标记方法，以减少由胶体金粒径大小、pH等因素而对胶体金标记效率产生的不利影响，从而提高胶体金标记过程的稳定性，并降低胶体金标记失败的风险。

发明内容

鉴于现有技术中的不足，本发明提供了一种胶体金标记方法及其产品。本发明所提供的胶体金标记方法减少了由胶体金粒径大小、pH等因素而对胶体金标记效率产生的不利影响，此外还提高了胶体金标记过程的稳定性，并降低了胶体金标记失败的风险。

本发明用于实现上述目的的技术方案如下：

在本发明的一个方面，提供了一种胶体金标记方法，其包括以下步骤：

制备待用胶体金溶液；

调节所述待用胶体金溶液的pH值，获得标准胶体金溶液；

向所述标准胶体金溶液中添加表面活性剂，搅拌混匀；后添加待标记蛋白或待标记抗体的溶液，搅拌混匀；再添加封闭剂，搅拌混匀；得到包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液；

将所述包含有所述待标记蛋白或待标记抗体的胶体金溶液离心，弃去上清液，取沉淀物；将所述沉淀物经胶体金复溶液复溶后得到金标复合物溶液；

筛选所述金标复合物溶液的最佳稀释倍数；

将所述金标复合物溶液按照所述最佳稀释倍数进行稀释，得到金标复合物稀释液，采用所述金标复合物稀释液制备金垫；