[发明专利]Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株、灭活疫苗及制备方法

说明书

本发明提供Ⅰ群4型禽腺病毒SD‑F株、灭活疫苗及制备方法，属于生物工程领域。Ⅰ群4型禽腺病毒SD‑F株，保藏编号：CCTCC NO：V201964。该禽腺病毒灭活疫苗的制备方法如下：将Ⅰ群4型禽腺病毒SD‑F株病毒液灭活，然后与吐温‑80混合，搅拌混匀，得到水相；将白油与司本‑80混合，搅拌均匀，灭菌后得到油相；将水相与油相按体积比为1:2‑4混合，乳化，即得灭活疫苗。本发明SD‑F株能够适应无致瘤性的DF‑1细胞，制备工艺简单，成本低，无致瘤风险，安全性较高；其灭活疫苗免疫保护率高，免疫后9天抗体阳性率达90%以上，免疫持续期达到6个月，且子代攻毒保护率为90%以上，攻毒保护率为100%。

技术领域

本发明涉及一种禽腺病毒蚀斑克隆纯化毒株，灭活疫苗及制备方法，属于生物工程领域。

背景技术

禽腺病毒为新近流行的急性接触性传染病，感染在鸡群中较为普遍，甚至呈全国性流行，且呈逐年上升趋势。该病主要垂直传播，也可水平传播，鸡感染后，可成为终身携带者，并可间歇性排毒。发病的宿主范围越来越广，白羽肉鸡、蛋鸡、黄羽鸡均可感染发病。此病死亡率为20％～80％，给养殖业带来巨大的经济损失。由于本病为新发病，商品化疫苗极少，而控制本病，最有效的方法就是免疫预防。目前禽腺病毒4型主要是通过SPF鸡胚进行病毒增殖，或用致瘤性的LMH细胞增殖。用鸡胚增殖在大规模生产中，工艺繁琐、成本昂贵，用致瘤性的LMH虽然可以增殖，但LMH细胞有致瘤性，给疫苗生产造成潜在的致瘤风险，从而严重阻碍禽腺病毒疫苗的研究进程。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株，该毒株能够适应无致瘤性的DF-1细胞，制备工艺简单，成本低，无致瘤风险，安全性较高。

本发明的再一目的是提供采用上述Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株制备的禽腺病毒灭活疫苗，安全性、免疫保护率高，免疫后9天抗体阳性率达90％以上，免疫持续期达到6个月，且子代攻毒保护率为90％以上。

本发明的另一目的是提供上述灭活疫苗的制备方法，由于Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株采用无致瘤性的DF-1细胞进行增殖，因此安全性高，操作简单，成本低。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株，保藏编号：CCTCC NO：V201964。

本发明提供一种禽腺病毒灭活疫苗，抗原为灭活的Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株，该SD-F株的保藏编号为CCTCC NO：V201964。

本发明还提供所述禽腺病毒灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：

(1)将Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株病毒液灭活，然后与吐温-80混合，搅拌混匀，得到水相；

(2)将白油与司本-80混合，搅拌均匀，灭菌后得到油相；

(3)将水相与油相按体积比为1:2-4混合，乳化，即得Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株灭活疫苗。

在本发明中，步骤(1)中所述病毒液采用DF-1细胞测定病毒含量不低于10^5.5TCID₅₀/ml。

在本发明中，步骤(1)中所述病毒液是将Ⅰ群4型禽腺病毒SD-F株采用DF-1细胞增殖后获得。

在本发明中，步骤(1)中灭活后的病毒液中甲醛的体积百分含量为0.15％-0.2％。

在本发明中，步骤(1)中灭活后的病毒液与吐温-80的体积比为94:6。

在本发明中，步骤(2)中白油与司本-80的体积比为94:6。