[发明专利]一种重楼药材的炮制工艺

说明书

本发明公开了高品质重楼药材的炮制工艺，涉及滇重楼炮制领域，本发明包括接种块制备、低龄块茎打孔，富集接种培养，切片干制等步骤，本发明将滇重楼内生菌在低龄滇重楼块茎内进行人工原位富集培养，促进低龄滇重楼块茎内的皂苷活性物质快速富集，有效提高了低龄滇重楼块茎内的皂苷含量，提升药用价值，大幅缩短了滇重楼药材的生产周期。

技术领域

本发明涉及滇重楼炮制领域，特别涉及高品质重楼药材的炮制工艺。

背景技术

滇重楼为百合科重楼属植物云南重楼的干燥根茎，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效。其主要的活性成分为重楼皂苷，约占总化合物数目的80％，但重楼皂苷含量不仅受地理环境、土壤和气候的影响而存在差异，不同的加工炮制方法同样会影响重楼皂苷含量。

滇重楼中有益内生菌可与宿主植物产生互利效应，宿主植物因此受到很多影响，包括能产生甾体皂苷类化合物、增强滇重楼的抗病能力、抵御生长环境胁迫能力、提高滇重楼产率、转化或修饰滇重楼中活性次生代谢产物。王茜等的研究显示：从滇重楼块茎、根、叶中分离得到749株内生真菌，分别归属于41个属，其中尖孢镰刀菌、粘鞭霉属和曲霉属能产甾体皂苷的活性菌[GUO L D,HYDE K D,LIEW E C.Detection and taxonomicplacementof endophytic fungi within frond tissuesof Livistona chinensis based on rDNAsequences[J].Molecular Phylogenetics and Evolution,2001,20(1):1.DOI:10.1006/mpev.2001.0942.]；也有研究显示，重楼内生菌能够促进滇重楼甾体皂苷的积累[李艳冰,刘涛,林亮,et al.促进滇重楼皂苷类活性成分积累的内生真菌筛选[J].云南农业大学学报:自然科学版,2019.]。

近年来随着滇重楼药用价值的深度开发利用，药用范围不断扩大，现有药源已远不能供应市场需求。野生资源有限加之生长周期较长，地下块茎的生长速度十分缓慢，需历经多年的生长累积，才能使种子生长为具有药用价值的成苗。因此，如何扩大药用滇重楼的产能及品质成为当务之急。

发明内容

本发明所要解决的技术问题：如何利用重楼内生菌提高低龄滇重楼块茎中的活性皂苷含量，进而炮制获得高皂苷含量的重楼饮片。

为解决上述技术问题，本发明提供以下的技术方案：

高品质重楼药材的炮制工艺，包含如下具体步骤：

(1)将新鲜的2～4年生低龄滇重楼块茎收获后去除泥土，清水洗净，外部彻底消毒后备用；

(2)将十年生的滇重楼块茎消毒切块后，无菌条件下接种于PDA培养基中，无菌条件下富集培养，切取柱状内生菌富集培养物作为内生菌接种块；

(3)无菌操作条件下，在消毒后的低龄滇重楼块茎上打若干接种孔，将内生菌接种块填入接种孔中，无菌滤纸贴合封闭孔口；

(4)将接种后的低龄滇重楼块茎置于恒温恒湿黑暗环境下无菌培养15～50天得富集块茎；

(5)将富集块茎切片后直接脱水干制即得重楼饮片。

优选地，所述步骤(1)和(2)中的消毒步骤具体为：采用75％乙醇浸泡消毒1min，无菌水冲洗三次，100～200ppm次氯酸钠浸泡消毒4min,无菌水冲洗4次，接着用无菌水浸泡30min，后用100～200ppm次氯酸钠消毒处理2min，无菌水冲洗4次，用无菌滤纸吸干水分待用。

优选地，所述PDA培养基为含150mg/L的硫酸链霉素和150mg/L盐酸四环素的双抗PDA培养基。

优选地，所述步骤(2)中将消毒处理后的块茎用解剖刀切成3cm见方的正方体，置于 PDA培养基平板内，28℃，培养4～8d，待正方体上及周边长满菌丝后，在正方体边缘切取柱状块。