[发明专利]一种用于非诊断和治疗目的的高敏感病原核酸快速检测技术

说明书

本发明涉及病毒检测技术领域。本发明提供了一种用于非诊断和治疗目的的高敏感病原核酸快速检测技术，包括如下步骤：(1)重组酶等温扩增；(2)胶体金显色。本申请的高敏感病原核酸快速检测技术使用等温核酸扩增‑胶体金显色，用于病原体现场检测，不需要特殊设备和试剂，同时省去病原体提取步骤，可以极限捕捉和放大病原体核酸信号，直接检测病人痰、血、粪便等样品，非常适用于现场检测、医院的床边诊断，学校、机场等人群聚集生活场景和其他资源极少的情况的应用，特别是亟需快速得出结果的场景。可以解决现有技术中检测病原体核酸依赖大型设备和试剂，检测周期长，敏感性和需要提取病原体的缺点。

技术领域

本发明涉及病毒检测技术领域，尤其涉及一种用于非诊断和治疗目的的 高敏感病原核酸快速检测技术。

背景技术

分子诊断最重要的基础是核酸扩增技术。目前主流DNA扩增技术需要 精密的变温设备，复杂的试剂盒(储存和运输条件要求高)，复杂样品处理 流程和专业人员，所以在现场应用和人群检测等场景的应用非常有限。

目前新冠状病毒肺炎核酸检测多采用逆转录PCR荧光法，检测周期长， 至少需要48～72小时，依赖大型、特殊，昂贵设备，试剂和专业人员，检测 的敏感性大约在30％～50％。同时新冠状病毒肺炎病毒的样品采集后必须进 行病毒核酸(RNA)提取和富集，而现有病毒采集方法难以顺利到达现有方 法检测下限，成为另外一个重大技术瓶颈。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于非诊断和治疗目的的高敏感病原核酸 快速检测技术，可以绕过病原体提取步骤。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种用于非诊断和治疗目的的高敏感病原核酸快速检测 技术，包括如下步骤：

(1)重组酶等温扩增；

(2)胶体金显色。

作为优选，所述重组酶等温扩增过程中分别扩增ORF基因和S基因。

作为优选，所述重组酶等温扩增过程中所用的ORF基因正向引物和S 基因正向引物均含有biotin标记，所用的ORF基因反向引物和S基因反向 引物均含有FAM标记或digoxingenine标记。

作为优选，所述重组酶等温扩增的时间为15～25min。

作为优选，所述重组酶等温扩增的温度为40～44℃。

作为优选，所述胶体金显色采用PCRD胶体金试纸。

作为优选，所述胶体金显色时将ORF基因扩增的产物和S基因扩增的 产物在同一块胶体金试纸上同时检测。

作为优选，所述步骤(1)和步骤(2)之间还包含重组酶扩增产物的PCR。

本发明还提供了一种新冠肺炎病毒ORF基因引物对，包含ORF基因正 向引物和ORF基因反向引物，所述ORF基因正向引物序列如SEQ ID NO： 1所示，所述ORF基因反向引物序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供了一种新冠肺炎病毒S基因引物对，包含S基因正向引物 和S基因反向引物，所述S基因正向引物序列如SEQ ID NO：3所示，所述 S基因反向引物序列如SEQ IDNO：4所示。