[发明专利]病毒保存液、试剂盒以及病毒RNA的超灵敏检测方法

权利要求书

1.一种病毒保存液，其特征在于，所述病毒保存液中含有4～6.5M胍盐，0.5-2％N-月桂酰基肌氨酸以及0.2～1M柠檬酸钠。

2.一种用于病毒RNA提取的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的病毒保存液；

优选地，所述试剂盒中还包括：内含过滤柱的离心管，纳米磁珠，结合缓冲液，清洗缓冲液，50～80％乙醇以及洗脱液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述结合缓冲液中包含无水乙醇或异丙醇；

和/或，所述清洗缓冲液包括清洗缓冲液I和清洗缓冲液II；其中，所述清洗缓冲液I包含1～2M胍盐以及50～80％乙醇，所述清洗缓冲液II包含50～80％乙醇。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括的病毒保存液与结合缓冲液的体积之比为(3～7)：(2.5～3.5)。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括的纳米磁珠质量与所述结合缓冲液的体积之比为(1.5mg～4mg)：300ul，优选为2mg：300ul。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括的病毒保存液、结合缓冲液以及洗脱液的体积之比为(30～70)：(25～35)：(3～7)。

7.权利要求1所述病毒保存液或权利要求2～6任意一项所述试剂盒在病毒RNA提取和/或检测中的应用；

优选地，待提取或检测的病毒样本为人体咽拭子采样所获得的单独样本，或者多组人体咽拭子采样所获得的样本混合后的混合样本。

8.一种病毒RNA的超灵敏检测方法，其特征在于，利用权利要求1所述病毒保存液或权利要求2～6任意一项所述试剂盒，包括如下步骤：将待提取的病毒样本置于所述病毒保存液中保存；对保存的病毒样本进行RNA提取，再进行检测；

优选地，待提取或检测的病毒样本为人体咽拭子采样所获得的单独样本，或者多组人体咽拭子采样所获得的样本混合后的混合样本。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)取保存于所述保存液中的样本溶液，置于内含过滤柱的离心管中离心处理后，取全部滤液；

(2)在步骤(1)所得滤液中加入结合缓冲液，混匀后，加入纳米磁珠；

(3)加热混匀后，用磁铁吸附纳米磁珠，弃上清；

(4)加入清洗缓冲液，混匀后，用磁铁吸附纳米磁珠，弃上清；

(5)加入50～80％乙醇，混匀后，用磁铁吸附纳米磁珠，弃上清；

(6)加入洗脱液，混匀加热后，用磁铁吸附纳米磁珠，将含有病毒RNA的上清液保存备用；

优选地，所述保存于所述保存液中的样本溶液、结合缓冲液、纳米磁珠和洗脱液的用量比为(300ul～700ul)：(250ul～350ul)：(1.5mg～4mg)：(30ul～70ul)。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述离心为：以转速5000rpm～13000rpm离心30s～90s；

和/或，步骤(3)所述加热混匀为：在50～60℃加热8～20分钟，期间每隔2～3分钟混匀一次；

和/或，步骤(6)所述混匀加热为：吹打混匀后，在50～80℃加热5～10分钟。