[发明专利]一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白及其表达和应用在审
| 申请号： | 202010774513.3 | 申请日： | 2020-08-04 |
| 公开（公告）号： | CN111978410A | 公开（公告）日： | 2020-11-24 |
| 发明（设计）人： | 吕素芳;李峰;董炳梅;郭广君;沈志强;胡莉萍 | 申请（专利权）人： | 山东省滨州畜牧兽医研究院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N15/66;C12P21/02;A61K39/10;A61P31/04;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58;C07K16/12 |
| 代理公司： | 济南舜源专利事务所有限公司 37205 | 代理人： | 于晓晓 |
| 地址： | 256600 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 布鲁氏菌 膜蛋白 omp25 蛋白 bp26 融合 及其 表达 应用 | ||
1.一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白，其特征在于，将OMP25蛋白N端信号肽序列与BP26蛋白N端信号肽序列删除，保留其抗原决定簇序列，中间通过Linker序列GGAGGCGGGGGTTCTGGAGGCGGGGGTTCT将之连接成为融合蛋白；所述的OMP25蛋白N端信号肽序列为第1个aa～29个aa，所述的BP26蛋白N端信号肽序列为第1个aa～24个aa。
2.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白，其特征在于，根据pET28a(+)载体的多克隆位点，在OMP25蛋白序列的两端分别引入NdeI和BamH1两个酶切位点及保护碱基GGAATTC和CG，在BP26蛋白序列的两端分别引入BamH1和EcoR I两个酶切位点及保护碱基CG和C，便于插入表达载体pET28a(+)中。
3.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白，其特征在于，含有布鲁氏菌外膜蛋白OMP25的抗原表位氨基酸序列，第25个aa-第213个aa，共189aa：
含有布鲁氏菌周质蛋白BP26的抗原表位氨基酸序列，第30个aa-第250个aa，共221aa：
构建的含有布鲁氏菌外膜蛋白OMP25和周质蛋白BP26的融合蛋白的抗原表位氨基酸序列422aa：
4.根据权利要求1所述的一种布鲁氏菌外膜蛋白OMP25与周质蛋白BP26的融合蛋白，其特征在于，含有布鲁氏菌外膜蛋白OMP25的抗原表位基因的DNA序列，588bp：
GGAATTCCATATGGACGCCATCCAGGAACAGCCTCCGGTTCCGGCTCCGGTTGAAGTAGCTCCCCAGTATAGCTGGGCTGGTGGCTATACCGGTCTTTACCTTGGCTACGGCTGGAACAAGGCCAAGACCAGCACCGTTGGCAGCATCAAGCCTGACGATTGGAAGGCTGGCGCCTTTGCTGGCTGGAACTTCCAGCAGGACCAGATCGTATACGGTGTTGAAGGTGATGCAGGTTATTCCTGGGCCAAGAAGTCCAAGGACGGCCTGGAAGTCAAGCAGGGCTTTGAAGGCTCGCTGCGTGCCCGCGTTGGCTACGACCTGAACCCGGTTATGCCGTACCTCACGGCTGGTATTGCCGGTTCGCAGATCAAGCTTAACAACGGCTTGGACGACGAAAGCAAGTTCCGCGTGGGTTGGACGGCTGGTGCCGGTCTCGAAGCCAAGCTGACGGACAACATCCTCGGCCGCGTTGAGTACCGTTACACCCAGTACGGCAACAAGAACTATGATCTGGCCGGTACGACTGTTCGCAACAAGCTGGACACGCAGGATTTCCGCGTCGGCATCGGCTACAAGTTCGGATCCCG
含有布鲁氏菌周质蛋白BP26的抗原表位基因的DNA序列(681bp)：
CGGGATCCGAGAATCAGATGACGACGCAGCCCGCGCGCATCGCCGTCACCGGGGAAGGCATGATGACGGCCTCGCCCGATATGGCCATTCTCAATCTCTCGGTGCTACGCCAGGCAAAGACCGCGCGCGAAGCCATGACCGCGAATAATGAAGCCATGACAAAAGTGCTCGATGCCATGAAGAAGGCCGGCATCGAAGATCGCGATCTCCAGACAGGCGGCATCAATATCCAGCCGATTTATGTCTATCCTGACGACAAGAACAACCTGAAAGAGCCTACCATCACCGGCTATTCTGTATCCACCAGTCTCACGGTTCGCGTGCGCGAACTGGCCAATGTTGGAAAAATTTTGGATGAATCCGTCACGCTCGGTGTTAATCAGGGCGGTGATTTGAACCTGGTCAATGATAATCCCTCTGCCGTGATCAACGAGGCGCGCAAGCGCGCAGTGGCCAATGCCATTGCCAAGGCGAAGACGCTTGCCGACGCTGCAGGCGTGGGGCTTGGCCGTGTGGTGGAAATCAGTGAACTGAGCCGCCCGCCCATGCCGATGCCAATTGCGCGCGGACAGTTCAGAACCATGCTAGCAGCCGCACCGGACAATTCCGTGCCGATTGCCGCAGGCGAAAACAGCTATAACGTATCGGTCAATGTCGTTTTTGAAATCAAGTAAGAATTCC
构建的含有布鲁氏菌外膜蛋白OMP25和周质蛋白BP26的融合蛋白抗原表位基因的DNA序列，1289bp：
GGAATTCCATATGGACGCCATCCAGGAACAGCCTCCGGTTCCGGCTCCGGTTGAAGTAGCTCCCCAGTATAGCTGGGCTGGTGGCTATACCGGTCTTTACCTTGGCTACGGCTGGAACAAGGCCAAGACCAGCACCGTTGGCAGCATCAAGCCTGACGATTGGAAGGCTGGCGCCTTTGCTGGCTGGAACTTCCAGCAGGACCAGATCGTATACGGTGTTGAAGGTGATGCAGGTTATTCCTGGGCCAAGAAGTCCAAGGACGGCCTGGAAGTCAAGCAGGGCTTTGAAGGCTCGCTGCGTGCCCGCGTTGGCTACGACCTGAACCCGGTTATGCCGTACCTCACGGCTGGTATTGCCGGTTCGCAGATCAAGCTTAACAACGGCTTGGACGACGAAAGCAAGTTCCGCGTGGGTTGGACGGCTGGTGCCGGTCTCGAAGCCAAGCTGACGGACAACATCCTCGGCCGCGTTGAGTACCGTTACACCCAGTACGGCAACAAGAACTATGATCTGGCCGGTACGACTGTTCGCAACAAGCTGGACACGCAGGATTTCCGCGTCGGCATCGGCTACAAGTTCGGAGGCGGGGGTTCTGGAGGCGGGGGTTCTATGAACGAGAATCAGATGACGACGCAGCCCGCGCGCATCGCCGTCACCGGGGAAGGCATGATGACGGCCTCGCCCGATATGGCCATTCTCAATCTCTCGGTGCTACGCCAGGCAAAGACCGCGCGCGAAGCCATGACCGCGAATAATGAAGCCATGACAAAAGTGCTCGATGCCATGAAGAAGGCCGGCATCGAAGATCGCGATCTCCAGACAGGCGGCATCAATATCCAGCCGATTTATGTCTATCCTGACGACAAGAACAACCTGAAAGAGCCTACCATCACCGGCTATTCTGTATCCACCAGTCTCACGGTTCGCGTGCGCGAACTGGCCAATGTTGGAAAAATTTTGGATGAATCCGTCACGCTCGGTGTTAATCAGGGCGGTGATTTGAACCTGGTCAATGATAATCCCTCTGCCGTGATCAACGAGGCGCGCAAGCGCGCAGTGGCCAATGCCATTGCCAAGGCGAAGACGCTTGCCGACGCTGCAGGCGTGGGGCTTGGCCGTGTGGTGGAAATCAGTGAACTGAGCCGCCCGCCCATGCCGATGCCAATTGCGCGCGGACAGTTCAGAACCATGCTAGCAGCCGCACCGGACAATTCCGTGCCGATTGCCGCAGGCGAAAACAGCTATAACGTATCGGTCAATGTCGTTTTTGAAATCAAGTAAGAATTCC。
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