[发明专利]一种冷鲜驴肉复配天然保鲜剂的制备方法

权利要求书

1.一种冷鲜驴肉复配天然保鲜剂的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

步骤1)、驴肉优势腐败菌鉴定：将冷鲜驴肉样品真空包装于灭菌后的食品级PE包装袋中，于4℃冷藏储存至15d，驴肉腐败变质后，测得驴肉的腐败菌相中含有乳酸菌、假单胞菌、肠杆菌、热死环丝菌，且乳酸菌、假单胞菌、肠杆菌、热死环丝菌分别占腐败菌相的54.81％、34.07％、5.19％、4.81％；将乳酸菌、假单胞菌、肠杆菌、热死环丝菌菌种分离纯化进行16SrDNA鉴定，冷鲜驴肉的腐败优势菌为清酒乳杆菌(G⁺)和荧光假单胞菌(G^-)，4种肠杆菌为哈夫尼肠杆菌(G^-)、液化沙雷氏菌(G^-)、蜂窝哈夫尼亚菌(G^-)和解鸟氨酸拉乌尔菌(G^-)；

香辛料的提取：称取80目香辛料20.00g置于500mL圆底烧瓶内，按料液比1:10(g/mL)加入95％乙醇溶液，将装有香辛料和乙醇的圆底烧瓶于85℃水浴锅中回流提取香辛料3h，抽滤，再重复提取香辛料3次，并抽滤；接着合并滤液，再用旋转蒸发仪真空浓缩(50℃，-0.1MPa)滤液，蒸发溶剂，用无菌蒸馏水溶解香辛料粗提物，-20℃冷冻保存12h，真空冷冻干燥48h得香辛料醇提物；提取的香辛料醇提物分别为：生姜醇提物、丁香醇提物和迷迭香醇提物；同时，准备食品级Nisin Z、抗坏血酸和白藜芦醇；其中，生姜醇提物、丁香醇提物和Nisin Z为天然抑菌剂，抗坏血酸、迷迭香醇提物和白藜芦醇为天然抗氧化剂；

步骤2)、以步骤1)鉴定的清酒乳杆菌(G⁺)、荧光假单胞菌(G^-)、液化沙雷氏菌(G^-)、蜂窝哈夫尼亚菌(G^-)和解鸟氨酸拉乌尔菌(G^-)为受试菌种；通过96孔板微量酶标仪法测得生姜醇提物、丁香醇提物和Nisin Z对受试菌种的最低抑菌浓度(MIC)；用不同浓度的生姜醇提物、丁香醇提物和Nisin Z处理冷鲜驴肉，真空包装于4℃温度中放置10d后，进行感官评定得到感官评定最佳浓度；综合96孔板微量酶标仪法和感官评定得到的结果为单因素实验结果，在单因素基础上运用Design Expert8.0.6进行实验设计，设计3因素3水平响应面实验，利用响应面优化得到生姜醇提物41.07mg/mL、丁香醇提物5.39mg/mL和Nisin Z 56.28mg/mL，考虑到实际操作的可行性，将此反应在以上理论值基础上修正并检测验证得生姜醇提物40.00g/mL、丁香醇提物5.50mg/mL和Nisin Z 55.00mg/mL；通过对抗坏血酸、迷迭香醇提物和白藜芦醇抗氧化能力单因素试验(DPPH自由基清除能力的测定方法)得到三种抗氧化剂DPPH自由基清除率最好浓度；用不同浓度抗坏血酸、迷迭香醇提物和白藜芦醇处理冷鲜驴肉，真空包装于4℃温度中放置10d后，进行感官评定得到感官评定最佳浓度；综合抗氧化能力单因素试验和感官评定得到的结果为单因素实验结果，在单因素基础上运用DesignExpert8.0.6进行实验设计，设计3因素3水平响应面实验，利用响应面优化得到抗坏血酸30.64mg/mL、迷迭香醇提物0.68mg/mL和白藜芦醇31.83mg/mL，考虑到实际操作的可行性，将此反应在以上理论值基础上修正并检测验证得抗坏血酸30.00mg/mL、迷迭香醇提物0.65mg/mL和白藜芦醇30.00mg/mL；

最终得到最优复合天然保鲜剂配方为生姜醇提物40.00mg/mL、丁香醇提物5.50mg/mL、Nisin Z 55.00mg/mL、抗坏血酸30.00mg/mL、迷迭香醇提物0.65mg/mL和白藜芦醇30.00mg/mL。

2.根据权利要求1所述的一种冷鲜驴肉复配天然保鲜剂的制备方法，其特征在于，使用时，将经步骤2)配制好的复配天然保鲜剂对冷鲜驴肉喷淋，食品级PE保鲜袋真空包装，密封冷藏，完成冷鲜驴肉的冷藏。

3.根据权利要求2所述的一种冷鲜驴肉复配天然保鲜剂的制备方法，其特征在于，天然复合保鲜剂中各物质的配比为生姜醇提物：丁香醇提物：Nisin Z＝1:1:1配制，抗坏血酸：迷迭香醇提物：白藜芦醇＝1:1:1配制；在无菌环境中均匀喷洒于驴肉表面，正反面各一次，喷淋1次约0.1mL，晾干5min后真空包装放置于4℃冰箱中。