[发明专利]水解酶基因strH及其编码的蛋白和应用

说明书

本发明公开了水解酶基因strH及其编码的蛋白和应用。本发明水解酶基因strH全长为1713bp，序列如SEQ ID NO.1所示，其编码产物水解酶StrH含570个氨基酸，序列为SEQ ID NO.2。TriH能降解肟菌酯杀菌剂。水解酶StrH可用于降解土壤、水体中甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂的残留，具有非常重要的理论和应用价值。

技术领域

本发明属于应用环境微生物和农业领域，涉及水解酶基因strH及其编码的蛋白和应用，具体涉及降解甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂水解酶基因strH和其应用。

背景技术

甲氧基丙烯酸酯类(strobilurins)杀真菌剂是以天然化合物strobilurin A为先导化合物开发的一类新型杀真菌剂，对真菌(担子菌纲、子囊菌纲、卵菌纲和半知菌纲等)引起的病害均具有较好的活性，适用于防治大豆、谷物、马铃薯、蔬菜和果树等多种作物的病害。其具有广谱、高效、作用机制独特等优点，使其上市以年来发展迅速，在2009年成为全球销售量最大的一类杀菌剂。肟菌酯，啶氧菌酯，吡唑醚菌酯，嘧菌酯是甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂的代表且被广泛使用的种类，主要用于防治作物、蔬菜和水果等农产品的真菌病害。

获得甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂(肟菌酯，啶氧菌酯，吡唑醚菌酯，嘧菌酯)降解菌株和降解基因在治理环境中的氧基丙烯酸酯类杀真菌剂残留有以下作用：(1)用于土壤、水体中甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂残留的消除；(2)通过基因研究构建基因工程菌株，进而研究酶学特性，对氧基丙烯酸酯类杀真菌剂污染修复具有重要意义。因此降解基因在消除该甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂残留具有非常重要的理论和应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂水解酶基因strH。

本发明的另一目的是提供该基因编码的蛋白。

本发明的又一目的是提供该基因的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一个水解酶基因strH，其核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

通过鸟枪法构建DNA文库的方法来寻找目的基因。首先采用高盐法提取菌株DY-1的基因组总DNA，用Sau3AI(TaKaRa)限制性内切酶部分酶切总DNA，回收1-6kb的酶切片段。回收片段与载体pUC118 BamHI/BAP用T₄连接酶16℃酶连，转化至高效感受态细胞E.coliDH5α中。通过平板影印从15,000个转化子中得到一个在含有100mg/L肟菌酯的LB平板上产生透明水解圈的阳性转化子。提质粒送于金斯瑞生物科技公司对其外源插入片段进行测序，氨基酸序列比对分析得到一水解酶基因strH。所述的水解酶基因strH编码的蛋白StrH，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

含有所述的水解酶基因strH的重组表达载体。

所述的重组表达载体优选将所述的水解酶基因strH连接pET29a(+)的NdeI和XhoI位点之间所得。

含有所述的水解酶基因strH的基因工程菌，所述的基因工程菌株优选以E.coliBL21(DE3)为出发菌株。

所述水解酶基因strH在降解甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂的应用；所述的甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂为肟菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯或嘧菌酯。

所述的含有水解酶基因strH的重组表达载体在降解甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂中的应用；所述的甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂为肟菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯或嘧菌酯。

所述水解酶蛋白StrH在降解甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂中的应用；所述的甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂为肟菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯或嘧菌酯。

所述水解酶蛋白StrH在去除土壤、水体中甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂中的应用；所述的甲氧基丙烯酸酯类杀真菌剂为肟菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯或嘧菌酯。