[发明专利]一种基于纳米材料的血小板抗体检测方法和血小板保存方法

权利要求书

1.一种基于纳米材料的血小板抗体检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)制备PLGA微球颗粒；

b)制备受试血小板样品的血小板膜囊泡；

c)将所述血小板膜囊泡与所述PLGA微球颗粒混合，超声，得到血小板膜蛋白包裹于PLGA微球颗粒表面的纳米级的复合微球；

d)将受试血清或血浆与所述复合微球孵育，洗涤后，再与荧光素标记的二抗避光孵育，洗涤，重悬，流式细胞仪上机检测；以不含血小板抗体的血浆或血清为阴性对照；

e)Cut off值设定为：阴性对照荧光平均值+2个标准差；若受试血清或血浆组荧光值大于等于Cut off值时，表明所述受试血清或血浆含有针对所述血小板样品的抗体；反之，亦然。

2.根据权利要求1所述的血小板抗体检测方法，其特征在于，步骤a)中，所述PLGA微球颗粒其制备方法为：将PLGA溶解于丙酮，混匀，配制成工作液；将所述工作液滴加到匀速转动的超纯水或去离子水中，待丙酮完全挥发，离心，收集沉淀，去离子水重悬，即得。

3.根据权利要求1所述的血小板抗体检测方法，其特征在于，步骤b)中，所述血小板膜囊泡其制备方法为：将所述受试血小板样品用洗涤液洗涤后，超纯水重悬，-80℃冻存，室温溶解、洗涤、重悬，如此反复2-4次，再超声处理即得，所述超声处理的参数为：20W，100Hz，超声1分钟。

4.根据权利要求1所述的血小板抗体检测方法，其特征在于，步骤c)中，制备所述复合微球的超声处理的参数为：40W，100Hz，水浴超声2分钟。

5.根据权利要求1所述的血小板抗体检测方法，其特征在于，步骤d)中，所述荧光素标记的二抗是所述受试血清或血浆的二抗。

6.根据权利要求1所述的血小板抗体检测方法，其特征在于，步骤d)中，所述荧光素标记的二抗是用APC,FITC,PE,PEcy5或PEcy5.5标记的二抗。

7.一种血小板保存方法，其特征在于，将采集的血小板按以下方法制备成为复合微球再低温保存：

a)制备PLGA微球颗粒；

b)制备受试血小板样品的血小板膜囊泡；

c)将所述血小板膜囊泡与所述PLGA微球颗粒混合，超声，得到血小板膜蛋白包裹于PLGA微球颗粒表面的纳米级的复合微球；

低温保存的复合微球进一步用于血小板抗体检测。