[发明专利]一种胰腺炎检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明公开了一种胰腺炎检测试剂盒，包括PCR反应液、DNA聚合酶、阴性对照样品以及阳性对照样品，PCR反应液包括PCR Buffer、引物和探针，且上述原料体积与数量分别为0.89Lx2份，聚合酶为Taq DNA聚合酶，且上述原料体积与数量分别为85μlx1份。本发明涉及基因工程技术领域，该胰腺炎检测试剂盒及检测方法，DNA甲基化与胰腺炎的复发和总生存率密切相关，基因组的DNA甲基化是胰腺炎患者最佳的诊断标志和预后指标。ELA3B在调节细胞基质作用和肿瘤血管新生、增生和迁移方面起关作用。ELA3B基因甲基化发生在胰腺炎早期，因此检测ELA3B基因甲基化对早期诊断非常有意义。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体为一种胰腺炎检测试剂盒及检测方法。

背景技术

在正常情况下，胰液在其腺体组织中含有无活性的胰酶原。胰液沿胰腺管道不断地经胆总管奥狄氏括约肌流入十二指肠，由于十二指肠内有胆汁存在，加上十二指肠壁黏膜分泌一种肠激酶，在二者的作用下，胰酶原开始转变成活性很强的消化酶。如果流出道受阻，排泄不畅，即可引起胰腺炎。当奥狄氏括约肌痉挛或胆管内压力升高，如结石、肿瘤阻塞，胆汁会反流入胰管并进入胰腺组织，此时，胆汁内所含的卵磷脂被胰液内所含的卵磷脂酶A分解为溶血卵磷脂，可对胰腺产生毒害作用。或者胆道感染时，细菌可释放出激酶将胰酶激活，同样可变成能损害和溶解胰腺组织的活性物质。这些物质将胰液中所含的胰酶原转化成胰蛋白酶，此酶消化活性强，渗透入胰腺组织引起自身消化，亦可引起胰腺炎。

目前检测胰腺炎的常规方法一般是通过EPS底物法检测胰腺炎，但是此方法准确率较低、对于胰腺炎初期症状检测效果较差，基于此，我们采用一种全新的胰腺炎检测手段，即弹性蛋白酶3B(ELA3B)基因在胰腺异常组织中异常表达来揭示胰腺炎，从而实现了早诊断、早治疗的目的。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种胰腺炎检测试剂盒及检测方法，具备及早诊断胰腺炎等优点，解决了现有胰腺炎诊断周期晚的问题。

(二)技术方案

为实现上述的目的，本发明提供如下技术方案：一种胰腺炎检测试剂盒，包括PCR反应液、DNA聚合酶、阴性对照样品以及阳性对照样品。

优选的，所述PCR反应液包括PCR Buffer、引物和探针，且上述原料体积与数量分别为0.89mLx2份。

优选的，所述聚合酶为Taq DNA聚合酶，且上述原料体积与数量分别为85μlx1份。

优选的，所述阴性对照样品包括WBC DNA、BSA和1xTE Buffer，且上述原料体积与数量分别为3.0mLx3管。

优选的，所述阴性对照样品包括3种，分别命名为阴性参考品X1-X3，阴性参考品X1-X3为一定DNA浓度不同的RNF180和Septin9均为阴性的参考品。

优选的，所述阳性对照样品阳性参考品包括6种，分别命名为阳性参考品P1-P6,其中阳性参考品P1-P3为一定DNA浓度不同的RNF180和SPARC双阳参考品；P4-P6为一定DNA浓度不同的RNF180单阳参考品。

一种胰腺炎检测试剂盒的检测方法(PCR法)，通过提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA，以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测30例胰腺癌、20例慢性胰腺炎和10例正常胰腺组织中ELA3B mRNA的表达,以甲基化特异性PCR(MSP)检测该基因启动子区甲基化水平。

(三)有益效果

与现有技术相比，本发明提供了一种胰腺炎检测试剂盒及检测方法，具备以下有益效果：