[发明专利]一种荧光探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种荧光探针，其特征在于，所述荧光探针具有如下式I所示结构：

2.根据权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)将fmoc基团保护的赖氨酸溶解在第一混合溶剂中，使其与4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑接触，得到式Ⅱ所示化合物；

(2)在第二溶剂中，使碳二亚胺缩合剂、酰化活化剂和式Ⅱ所示化合物以及1-苯基-3-[(4-氨甲基)氮杂环己烷]-2-丙醇接触，得到式Ⅲ所示的化合物；

(3)在第三有机溶剂中，使式Ⅲ所示的化合物发生fmoc脱保护反应，得到式Ⅰ所示的荧光探针。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述fmoc基团保护的赖氨酸与4-氯-7硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑的摩尔比为1:0.5-10。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述fmoc基团保护的赖氨酸与4-氯-7硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑的摩尔比为1:1。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述第一混合溶剂为甲醇和水的混合物或者DMF和三乙胺的混合物。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述第一混合溶剂为甲醇和水的混合物，所述甲醇和水的体积比为6:5。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述接触的温度为10-35℃。

8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述接触的时间为6-24小时。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述接触的时间为12小时。

10.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)还包括将fmoc基团保护的赖氨酸加入第一混合溶剂后，用碳酸钠调节反应液pH值至9-10。

11.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)还包括所述接触后，将最终反应液pH调为酸性，收集析出沉淀，并用饱和食盐水将pH值洗回中性，将粗产物真空干燥后，溶于甲醇与水的混合溶剂，并使用高效液相分离纯化。

12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述将最终反应液pH调为酸性时所用的pH调节剂为盐酸。

13.根据权利要求12所述的制备方法，其特征在于，所述盐酸为1M的盐酸。

14.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述使用高效液相分离纯化时，使用乙腈和水为洗脱液，以20：80体积比为初始梯度，100:0体积比为终止梯度进行梯度淋洗。

15.根据权利要求14所述的制备方法，其特征在于，所述梯度淋洗时间为20-40min。

16.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述第二溶剂为二甲基亚砜和甲醇的混合物、二氯甲烷和甲醇的混合物、N,N'-二甲基甲酰胺与甲醇的混合物或N,N'-二甲基甲酰胺。

17.根据权利要求16所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述第二溶剂为N,N'-二甲基甲酰胺与甲醇的混合物。

18.根据权利要求17所述的制备方法，其特征在于，所述N,N'-二甲基甲酰胺与甲醇的体积比为10：0-5。