[发明专利]一种单增李斯特菌核酸检测质粒DNA参考样品、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种单增李斯特菌核酸检测质粒DNA参考样品，其特征在于，采用包含来源于不同单增李斯特菌菌株的hlyA、plcB和inlA全长基因的片段插入质粒中形成；

所述单增李斯特菌核酸检测质粒DNA参考样品的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述hlyA、plcB和inlA基因以等比例串联；

所述hlyA、plcB和inlA基因间以不相关的基因片段进行隔开。

2.根据权利要求1所述的单增李斯特菌核酸检测质粒DNA参考样品，其特征在于，在260nm和280nm处的光密度值比值在1.8-2.0之间。

3.根据权利要求1所述的单增李斯特菌核酸检测质粒DNA参考样品，其特征在于，所述不相关的基因片段的核苷酸序列为aagtcg。

4.一种权利要求1-3任一项所述的单增李斯特菌核酸检测质粒DNA参考样品的制备方法，其特征在于，包括：

人工合成单增李斯特菌基因hlyA、plcB、inlA，基因之间用所述不相关的基因片段间隔；

合成后克隆插入质粒中，经单增李斯特菌扩增后，提取并提纯质粒；

测定浓度并分装；-70℃预冻，经升华和再干燥后，得到冻干粉，即所述单增李斯特菌核酸检测质粒DNA参考样品。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述质粒为pUC57载体质粒。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述方法还包括对核酸标准样品定性鉴定，通过特异性引物进行PCR扩增或测序进行定性分析，来确认所制备的质粒参考品包含完整和准确的目的DNA。

7.一种权利要求1-3任一项所述的单增李斯特菌核酸检测质粒DNA参考样品在检测单增李斯特菌中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，在进行单增李斯特菌检测时，所述单增李斯特菌核酸检测质粒DNA参考样品作为参考品或对照品。