[发明专利]一种用于VERO细胞的无血清培养基

说明书

本发明涉及一种用于VERO细胞的无血清培养基，其特征在于，包括氨基酸、蛋白质、维生素、无机盐类、血清替代因子、辅助成分；氨基酸包括：甘氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、苯异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸L；蛋白质包括：运铁蛋白、胃蛋白酶、过氧化氢酶、超滤植物源蛋白胨、酵母抽提物；血清替代因子包括：胰岛素、白细胞介素‑2、粘附因子、成纤维生长因子、皮质醇和甲状腺激素。本发明能够促进Vero细胞的快速贴壁，培养的Vero细胞能够保持较好的细胞形态，具有更好的细胞增殖速率，无血清培养基组分简单，降低了成本。

技术领域

本发明涉及培养基领域，具体是一种用于VERO细胞的无血清培养基。

背景技术

细胞培养在疫苗生产过程中发挥的作用越来越受人们的重视。而过去，在使用血清培养细胞的过程中，增加了细胞表达产物安全性的不确定因素，并且采用含血清的培养基进行细胞的培养，可能由于血清的存在导致过敏反应发生、批次间差异大、易受污染和成本较高等缺点，这一现实问题已经成为动物细胞无血清培养技术研究和应用的发展动力。随着无血清培养技术的不断进步，无血清培养已成为包括疫苗在内的生物技术药物生产的总趋势。

Vero细胞对多种病毒敏感，是现阶段病毒疫苗生产的最主要的细胞基质。Vero细胞无血清培养技术提高了病毒疫苗生产工艺的可靠性、产品质量的可控性和安全性。目前，Vero细胞无血清培养已在包括狂犬病疫苗、流行性乙型脑炎疫苗、流感疫苗、肾综合征出血热疫苗、甲型肝炎疫苗、呼肠病毒疫苗等的研发和生产中得到应用。

无血清培养基是在基础培养基的基础上，加入成分明确的血清替代成分，既能满足细胞的培养要求，又能有效避免因使用血清带来的诸多不利因素。因此，发展无血清培养基是细胞走向临床应用的重要条件。目前已有一些市售的无血清培养基，但是这些无血清培养基存在细胞贴壁性差、细胞增殖不够理想、价格昂贵、成分不明等缺陷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种质量可控、安全可靠、成分简单的培养Vero细胞用的无血清培养基，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于VERO细胞的无血清培养基，包括以下组成成分：氨基酸、蛋白质、维生素、无机盐类、血清替代因子、辅助成分；

所述的氨基酸包括甘氨酸14-20mg/L、丙氨酸2-5mg/L、精氨酸140-300mg/L、天冬酰胺20-59mg/L、天冬氨酸5-10mg/L、半胱氨酸14-20mg/L、胱氨酸24-75mg/L、谷氨酸5-10mg/L、谷氨酰胺98-200mg/L、组氨酸20-40mg/L、苯异亮氨酸24-75mg/L、亮氨酸24-75mg/L、赖氨酸59-94mg/L、蛋氨酸50-75mg/L、苯丙氨酸20-40mg/L、脯氨酸14-20mg/L、丝氨酸140-180mg/L、苏氨酸40-59mg/L、色氨酸5-10mg/L、酪氨酸200-300mg/L、缬氨酸24-59mg/L；

所述的蛋白质包括运铁蛋白10-14mg/L、胃蛋白酶5-10mg/L、过氧化氢酶2000-4000mg/L、超滤植物源蛋白胨超滤植物源蛋白胨98-480mg/L、酵母抽提物98-480mg/L；

所述的血清替代因子包括：胰岛素4-5.3mg/L、白细胞介素-2 1.1-1.3mg/L、粘附因子10-12mg/L、成纤维生长因子1.4-2.4mg/L、皮质醇2-3.4mg/L和甲状腺激素1.4-2.9mg/L。