[发明专利]一种基于单金属Cu-MOF模拟酶的多组分无标记的免疫传感器

权利要求书

1.一种基于单金属Cu-MOF模拟酶的多组分无标记的免疫传感器，其特征在于，用壳聚糖将单金属框架Cu-MOF模拟酶固定于环氧硅烷化微孔阵列界面，然后在Cu-MOF模拟酶传感界面修饰链霉亲和素，最后通过链霉亲和素对生物抗体的特异结合，将不同组分的捕获抗体分子分别分行或分列固定于微孔阵列界面制得该多组分无标记化学发光成像免疫传感器。

2.根据权利要求1所述的基于单金属Cu-MOF模拟酶的多组分无标记的免疫传感器，其特征在于，所述免疫传感器通过如下方法制备：

a ：利用丝网印刷工艺借助于定制模板在可抛式环氧基硅烷化载玻片上印刷多排多列排布的若干个微孔阵列，所述微孔孔径为2 mm，孔距及边心距离均为4 mm；

b：制备八面体形状的单金属框架Cu-MOF模拟酶纳米粒子；

c：将b步制得的单金属框架Cu-MOF模拟酶纳米粒子在去离子水中超声分散，分散浓度为3-5mg/mL，再与质量浓度为1.0-1.5%的壳聚糖溶液等体积混合，震荡均匀后滴入a步的微孔阵列的微孔表面，在室温下反应直至晾干，以形成一层Cu-MOF-壳聚糖的薄膜；

d：将链霉亲和素均匀滴加在c步的Cu-MOF-壳聚糖薄膜表面，置于4℃环境中晾干；

e：向d步得到的微孔阵列表面分行或分列分别滴加同组分或不同组分的生物素化抗体，使其与链霉亲和素功能化的微孔表面进行特异性结合，于4℃环境中密封温育3-4小时，然后用磷酸盐缓冲溶液冲洗掉多余的抗体并于氮气下吹干；

f：将牛血清蛋白封闭液均匀滴加在e步得到的界面，放置4℃环境中进行封闭，而后用磷酸盐缓冲溶液冲洗并于氮气下吹干，即可得到多组分无标记化学发光成像免疫分析传感器。

3.根据权利要求1所述的基于单金属Cu-MOF模拟酶的多组分无标记化学发光成像免疫传感器，其特征在于，所述可抛式环氧基硅烷化载玻片通过如下方法制得：

a1：将可抛式载玻片浸泡于水虎鱼酸溶液中8~12h，然后用去离子水冲洗干净后放置于室温下晾干，所述水虎鱼酸溶液由体积比为7:3的98%硫酸和过氧化氢的混合液；

a2：将上述处理后的载玻片浸泡于质量浓度为1%的GPTMS甲苯溶液中10-16 h，先用甲苯冲洗后再用无水乙醇冲洗，然后于室温下晾干或用氮气吹干。

4.根据权利要求1所述的基于单金属Cu-MOF模拟酶的多组分无标记化学发光成像免疫传感器，其特征在于：b步中，单金属框架Cu-MOF模拟酶通过如下方法制备：

b1：将三水合硝酸铜、聚乙烯吡咯烷酮K30分别加入到甲醇溶液中，搅拌形成溶液A，溶液A中三水合硝酸铜、聚乙烯吡咯烷酮K30的浓度分别为0.075mol/L和0.00016mol/L；

b2 :将1,3,5-苯三羧酸溶于甲醇溶液中，搅拌形成浓度为0.04~0.05mol/L的溶液B；

b3 :将溶液溶液B缓慢加入等体积的溶液A中，继续搅拌混合均匀，室温下静置24h以上；

b4 :离心收集洗涤b3步混合液中的固相产品，最后得到八面体结构的单金属框架Cu-MOF纳米粒子。

5.根据权利要求2所述的基于单金属Cu-MOF模拟酶的多组分无标记化学发光成像免疫传感器，其特征在于， d步中，链霉亲和素的浓度为10~15 µg/mL。

6.根据权利要求2所述的基于单金属Cu-MOF模拟酶的多组分无标记化学发光成像免疫传感器，其特征在于， e步中，生物素化抗体的浓度为1.0~5.0 µg/mL。

7.根据权利要求2所述的基于单金属Cu-MOF模拟酶的多组分无标记化学发光成像免疫传感器，其特征在于， e步中，不同组分的生物素化抗体为多个肿瘤标志物的不同抗源成分，分别分行或分列滴加在微孔阵列的不同行或列的微孔中。

8.根据权利要求2所述的基于单金属Cu-MOF模拟酶的多组分无标记化学发光成像免疫传感器，其特征在于， f步中，牛血清白蛋白封闭液的浓度为0.01~0.05 g/mL。