[发明专利]一种改良的小鼠骨髓组织切片H.E染色方法

说明书

本发明检测方法技术领域，公开了一种改良的小鼠骨髓组织切片H.E染色方法，通过适当增加前期二甲苯脱蜡透明步骤的时长，充分将石蜡溶解，从而使得染色液在染色时充分进入组织；同时减少了酒精的浓度梯度和高浓度酒精浸泡脱水的时长，可以效防止软化后的骨组织收缩变硬而影响切片质量；在利用弱碱性溶液2％碳酸氢钠对切片进行返蓝，提高了返蓝效率和效果，且降低了成本；并且在返蓝后使用蒸馏水洗涤，有利于提高伊红溶液的染色效果。本发明经改良后的小鼠骨髓组织切片H.E染色方法合理控制组织切片在染色时的时间，使各步骤的浸泡时间更为合理，提高了骨髓组织切片着色效果，达到快速且高效的组织切片染色标准，应用前景广泛。

技术领域

本发明属于检测方法技术领域，具体涉及一种改良的小鼠骨髓组织切片H.E染色方法。

背景技术

苏木精—伊红染色法(H.Ematoxylin-eosin staining)，简称H.E染色法，是石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

在病理组织学观察中，常常需要对小鼠的骨髓进行病理切片，以便于观察其疾病或药物对骨髓组织结构、骨髓细胞形态与数量等的影响；H.E染色法在组织切片中使用最广泛，利用碱性苏木素和酸性伊红两种染液对石蜡切片进行染色，染色的步骤与染液浸泡的时间决定了染色的质量，对后期切片观察中的清晰程度有很大的影响，决定了组织切片的质量。

在进行H.E染色时，操作人员应当密切关注试剂浓度改变和浸泡时间，并依据实际操作需求，合理控制温度、湿度环境，确保各项操作的合理、规范、科学。切片组织结构较为复杂，试验员在进行染色的过程中，应当控制好染色时间，同时保证染色剂能够和组织充分结合，确保各组织均可实现彻底染色。

标准的H.E染色包括以下步骤：

(20)中性树胶封片：用玻璃棒蘸中性树胶，滴在载玻片上组织边缘，镊子夹起载玻片边缘，将盖玻片轻轻盖住组织，使中性树胶在盖玻片下自由扩散，覆盖组织即可。

但由于苏木素浸泡染色时间与染色后的流水冲洗时长、伊红浸泡染色时间与染色后乙醇清洗时长都难以把握，过长过短都会对细胞着色造成很大的影响，细胞着色效果差不利于组织切片的观察，并且高浓度酒精会使脱钙软化的骨组织收缩变硬。

发明内容

本发明提出一种改良的小鼠骨髓组织切片H.E染色方法，以解决现有技术中存在的一个或多个技术问题，至少提供一种有益的选择或创造条件。

为了克服上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种改良的小鼠骨髓组织切片H.E染色方法，所述小鼠骨髓组织切片H.E染色方法中使用了碳酸氢钠溶液进行处理。

作为上述方案的进一步改进，所述小鼠骨髓组织切片H.E染色方法中先用2％的碳酸氢钠溶液进行浸泡，然后用流水冲洗。

作为上述方案的进一步改进，所述小鼠骨髓组织切片H.E染色方法中还用到了50％-100％的酒精。

作为上述方案的进一步改进，所述小鼠骨髓组织切片H.E染色方法中还用到了70％-100％的酒精。

作为上述方案的进一步改进，所述小鼠骨髓组织切片H.E染色方法包括以下步骤：

(19)中性树胶封片：用玻璃棒蘸中性树胶，滴在载玻片上组织边缘，镊子夹起载玻片边缘，将盖玻片轻轻盖住组织，使中性树胶在盖玻片下自由扩散，覆盖组织即可。