[发明专利]基于RAA-LF技术的金黄色葡萄球菌扩增引物及应用

权利要求书

1.一种基于RAA-LF技术的金黄色葡萄球菌扩增引物，其特征在于，上游引物和下游引物分别含有如下所示的核苷酸序列：

F：5’-TGGTTGCTGTCATGAATGTAGTTCAAAATC-3’；

R：5’-CGTTATTTTATTTTTGGCACTATTACTACCG-3’。

2.根据权利要求1所述的一种基于RAA-LF技术的金黄色葡萄球菌扩增引物，其特征在于，上游引物和下游引物的核苷酸序列为：

F：5’-TGGTTGCTGTCATGAATGTAGTTCAAAATC-3’；

R：5’-CGTTATTTTATTTTTGGCACTATTACTACCG-3’。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于RAA-LF技术的金黄色葡萄球菌扩增引物，其特征在于，上游引物与下游引物的5’端分别用荧光素和生物素类化合物标记。

4.根据权利要求3所述的一种基于RAA-LF技术的金黄色葡萄球菌扩增引物，其特征在于，所述荧光素为羧基荧光素6-FAM，生物素类化合物为Biotin。

5.根据权利要求1所述的一种基于RAA-LF技术的金黄色葡萄球菌扩增引物，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌为牛源性金黄色葡萄球菌。

6.一种基于RAA-LF技术的金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有如权利要求1或2所述的扩增引物对。

7.根据权利要求6所述的基于RAA-LF技术的金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，还包括RAA反应试剂盒和侧流层析试纸条。

8.根据权利要求7所述的基于RAA-LF技术的金黄色葡萄球菌检测试剂盒，其特征在于，所述RAA反应试剂盒包括含冻干酶粉反应管、基础缓冲液、无菌去离子水以及醋酸镁。

9.一种金黄色葡萄球菌的RAA-LF检测方法，其特征在于，步骤如下：

(1)提取待测样品的DNA；

(2)将如权利要求1～5任一项所述的引物和步骤(1)获取的待测样品的DNA配制得到RAA反应体系，RAA反应体系在33℃下恒温RAA扩增反应20～30min；

(3)取步骤(2)获取的RAA扩增产物滴加到侧流层析试纸条的加样区，将侧流层析试纸条加样区的末端垂直插入含有LF缓冲液的离心管中，5～10min后取出侧流层析试纸条进行观察并记录结果；

如侧流层析试纸条在质控线和检测线位置均有条带，待测样品含有金黄色葡萄球菌；

如侧流层析试纸条在质控线位置有条带且在检测线位置没有条带，待测样品不含有金黄色葡萄球菌，或待测样品中金黄色葡萄球菌的含量低于最低检出量；

如侧流层析试纸条在质控线和检测线位置均没有条带，侧流层析试纸条失效需重新检测。

10.根据权利要求9所述的一种金黄色葡萄球菌的RAA-LF检测方法，其特征在于，步骤(2)RAA反应体系中含有的所述上游引物和下游引物的浓度均为200nM，并且含有14mM醋酸镁。