[发明专利]一种细胞因子诱导杀伤细胞的体外活化方法

说明书

本发明公开了一种细胞因子诱导杀伤细胞的体外活化方法，涉及生物医药领域。具体而言，该方法在细胞培养前，使用浓度为0.1‑2％的明胶溶液包被培养瓶，之后吸除明胶溶液，接种细胞。相较于已有的专利方法，在培养CIK细胞前进行明胶包被，可显著增加目标细胞和自然杀伤细胞比例，增强细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。该方法不仅适用于CIK细胞培养，也可适用于自然杀伤细胞培养，具有极大的市场前景及经济价值。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种细胞因子诱导杀伤细胞的体外活化方法。

背景技术

癌症是严重威胁人类健康的疾病，随着人们寿命的延长，癌症已经是一种常见多发病，也是临床工作者经常面对的难题。癌症的治疗手段包括手术治疗、化学治疗、放射治疗及生物治疗。作为癌症治疗的较新颖的手段，生物治疗正逐渐从临床试验阶段进入临床应用，成为癌症治疗不可或缺的方式。细胞因子诱导杀伤细胞(cytokine-induced killercells，CIK细胞)，也是应用于临床新方法。在西欧，CIK细胞治疗已经获得政府批准，用于急性白血病及骨髓增生异常综合征的治疗。我国也已经开展了多项临床试验，用于治疗肝癌、肺癌、肾癌等实体瘤。CIK细胞也用于预防造血干细胞移植后复发[1]。此外，在CIK细胞群中，细胞毒作用的主要效应细胞是CD3⁺/CD56⁺的细胞，亦即是表达CD56的T淋巴细胞，因此具有MHC非限制性及限制性杀伤能力，因此，异体CIK细胞也适用于严重巨细胞病毒及EB病毒感染的控制[2,3]。总体上讲，CIK细胞治疗对于预防手术后癌症复发，以及某些类型白血病及骨髓增生异常综合征，都可能获得令人满意的效果。

在CIK细胞培养最终产品中有多种免疫细胞，包括自然杀伤细胞(NK细胞)，表达CD56分子而不表达CD3分子，称为CD3^-/CD56⁺，T淋巴细胞(CD3⁺/CD56^-)以及CD3⁺/CD56⁺细胞。常规CIK细胞培养中，培养的目的在于获得高比例的CD3⁺/CD56⁺细胞，这群细胞是CIK培养的目标细胞。在组成CIK细胞的群体中，具有较强肿瘤细胞杀伤能力的是CD3⁺/CD56⁺细胞和CD3^-/CD56⁺细胞，即目标细胞和NK细胞。但是，在常规CIK细胞培养体系中，NK细胞比例较低，发挥细胞毒作用的主要细胞为CD3⁺/CD56⁺细胞。然而，由于血液样品供者个体差异，以及常规体系中抗CD3单克隆抗体对T淋巴细胞刺激的非特异性，CD3⁺/CD56⁺细胞比例常较低，尤其是2周培养方案更是如此[4-6]。因此，有人通过抗人胸腺细胞球蛋白替代抗CD3抗体[4,5]，或使用重组人IL-15替代重组人IL-2[6]，以期获得更好的培养效果。然而，这些改变并没有提高NK细胞比例，培养体系中缺少了一种功能细胞。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是CIK细胞培养后，目标细胞比例偏低，杀伤功能不足。

本发明的一个目的是提供一种简易的刺激CIK细胞活化的方法，使获得的CIK细胞群中含有较多的CD3^-/CD56⁺细胞(NK细胞)和CD3⁺/CD56⁺细胞(CIK目标细胞)，细胞群体的杀伤能力更高，可能具有更好的临床应用前景。

本发明经过多次实验，找到了一种可以同时促使CD3⁺/CD56⁺细胞(CIK目标细胞)和CD3^-/CD56⁺细胞(NK细胞)增殖的活化剂。利用这种活化剂处理后的培养器皿，使用常规CIK培养方法培养细胞，即可获得含较高比例目标细胞的细胞群。该方法操作简单，并可同时获得较高比例的NK细胞，从而具有更强的细胞毒效力。