[发明专利]一种金黄色葡萄球菌噬菌体穿孔素及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种金黄色葡萄球菌噬菌体穿孔素及其制备方法和应用，具体公开了一种分离的金黄色葡萄球菌穿孔素蛋白，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。还公开了述的金黄色葡萄球菌穿孔素蛋白在制备治疗支原体感染疾病的药物中的用途。本发明首次发现噬菌体的穿孔素对支原体具有较强抑制作用，为治疗和抑制支原体疾病打下基础。

技术领域

本发明属于生物药物领域，涉及到一种金黄色葡萄球菌噬菌体穿孔素及其制备方法和应用范围。

背景技术

因为支原体广泛存在于自然界中，有些支原体是致病性支原体，所以对畜牧养殖业具有极大的危害性。例如肺炎支原体，既能让人类得病，也能够引起猪、牛、羊等养殖动物得病，导致大面积的死亡，给畜牧养殖业带来巨大经济损失。

传统畜牧养殖业，针对支原体疾病，普遍采用抗生素疗法。随着抗生素对生态环境的污染被大众所知，国际陆续出台文件，在不久的将来，抗生素将会退出畜牧养殖行业，所以，寻找能够替代抗生素治疗支原体疾病，并且具有良好效果的产品，将会具有广阔的经济效益和社会效益。

噬菌体是一类能够特异性识别并且感染细菌的病毒，它广泛存在于自然界中。相较于传统的抗生素治疗家畜细菌病，噬菌体具有独特的优势：不会产生广泛的耐药性；不会污染环境。噬菌体依靠独特的裂解酶和穿孔素，将细菌外膜和内膜破裂，杀死细菌。

发明内容

本发明的目的是开发一种来源于金黄色葡萄球菌噬菌体的穿孔素，该穿孔素能够应用在家畜养殖中抑制和杀灭致病支原体。发明人意外发现来源于噬菌体的穿孔素对支原体也具有显著的抑制作用。作为一类新型的抑菌剂，噬菌体穿孔素具有比抗生素更加广泛的应用优势，特别是针对绵羊肺炎支原体、猪肺炎支原体和鸡滑液囊支原体具有明显的抑制作用。

本发明通过下属技术方案实现：

本发明一个方面提供了一种金黄色葡萄球菌穿孔素蛋白，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

本发明另一个方面提供了一种编码金黄色葡萄球菌穿孔素蛋白SEQ ID No.2的核苷酸序列，优选地，其序列如SEQ ID No.1所示。

本发明再一个方面提供了一种金黄色葡萄球菌噬菌体穿孔素，其为由SEQ IDNo.1序列编码的蛋白。

本发明再一个方面提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体包含SEQ IDNo.1的核苷酸序列、编码SEQ ID No.2序列所示蛋白的核苷酸序列。

优选地，所述的表达载体是pColdTF载体。

本发明再一个方面提供了一种抗支原体制剂，其包括金黄色葡萄球菌穿孔素蛋白。

本发明再一个方面提供了金黄色葡萄球菌穿孔素蛋白在制备治疗支原体感染疾病的药物中的用途。

本发明再一个方面提供了金黄色葡萄球菌穿孔素蛋白作为抗支原体的制剂的用途。

优选地，所述的支原体选自绵羊肺炎支原体、鸡滑液囊支原体或猪肺炎支原体。

优选地，支原体感染疾病选自羊传染性胸膜肺炎、鸡滑液囊支原体病、猪支原体肺炎。

本发明再一个方面提供了金黄色葡萄球菌噬菌体穿孔素的制备方法，其包括如下步骤：

1)将核苷酸序列SEQ ID No.1克隆到原核表达重组载体上，获得重组表达质粒

2)将重组表达质粒转化进入大肠杆菌BL21表达菌株中，进行液体培养，诱导表达，收集菌液，提取纯化，获得的金黄色葡萄球菌噬菌体穿孔素HolSA2。

其中，所述的酶切采用SacI和XhoI双酶切。

其中，所述的表达载体是pColdTF载体。