[发明专利]登革病毒抗原的快速检测试纸

说明书

本发明公开了登革病毒抗原的快速检测试纸，将登革病毒DENV1和DENV3的NS1重组蛋白分别免疫小鼠，采取捕获法交叉筛选的方式获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，将登革病毒NS1单克隆抗体用于制备登革病毒抗原的快速检测试纸，该试纸可以检测出四种不同血清型的登革热病毒。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及登革病毒NS1单克隆抗体及其制备方法，以及基于该抗体的检测试纸。

背景技术

登革热是一种急性虫媒传染病，由登革热病毒经由蚊虫叮咬传播给人，可引起登革热和重症登革热，主要通过埃及伊蚊和白纹伊蚊传播。其典型的临床表现为起病急骤，高热，头痛，肌肉、骨关节剧烈酸痛，部分患者出现皮疹、出血倾向、淋巴结肿大、白细胞计数减少、血小板减少等。该病主要在热带及亚热带地区流行，我国的广东、香港、澳门等地是登革热流行区，一般在每年的5～11月份，高峰在7～9月份流行。根据其包膜蛋白的抗原特异性差异，将登革病毒分为四种血清型(DENV1～DENV4)。

登革NS1蛋白是登革病毒的一种重要的非结构蛋白，对登革病毒的测序结果显示，NS1在登革病毒各型别间具有高度保守性，其氨基酸同源型为70％。因此利用该蛋白制备的同一株单克隆抗体可以检测出不同血清型的登革病毒。目前检测试剂的一个问题在于快速诊断试剂的局限性，有一些临床样本的病毒含量极低，低于快诊试纸的检测限，无法检出；另一个问题在于有些试剂不能测出全部四种血清型，会有漏检的情况出现。

发明内容

本发明的目的之一是提供登革病毒NS1单克隆抗体及其制备方法：将登革病毒DENV1和DENV3的NS1重组蛋白分别免疫小鼠，取其脾脏细胞，并分别与SP2/0骨髓瘤细胞融合后制备杂交瘤细胞，DENV1型NS1蛋白免疫的融合细胞采用DENV2和DENV3型的NS1重组蛋白进行筛选，DENV3型NS1蛋白免疫的融合细胞采用DENV1和DENV4型NS1重组蛋白进行筛选，获得2株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，将筛选出的杂交瘤细胞分别注射至石蜡油致敏的小鼠腹腔中，取小鼠腹水，腹水抗体经纯化后即为登革病毒NS1单克隆抗体，分别标记为1号、2号抗体，。

在本发明的一个优选方案中，NS1重组蛋白的制备方法为：将合成的登革病毒DENV1～DENV4型的NS1基因序列分别插入含有S-tag标签的pCDNA3.1载体的多克隆位点，构建重组表达载体，瞬时转染293F细胞，提取纯化NS1重组蛋白。

本发明的另一个目的是提供登革病毒NS1单克隆抗体在制备检测登革病毒抗原试剂中的应用。

在本发明的一个优选方案中，登革病毒抗原的快速检测试纸包括样品垫、胶体金垫、NC膜、吸收垫、底板，胶体金垫含有2号抗体，NC膜的测试线含有1号抗体，NC膜的质控线含有羊抗鼠IgG多抗。

本发明具有以下优点：

1、以这种方法筛选出的杂交瘤细胞制备的单克隆抗体不仅保有良好的亲和力及特异性，组合形成的快速检测试纸可以检测出四种不同血清型的登革热病毒。

2、制备的真核抗原上带有S-tag标签，筛选时采取S-tag单抗标记辣根酶进行检测。以标签蛋白为检测信号，不会占用抗体与抗原的结合位点，可以筛选到位点更丰富的单克隆抗体。

附图说明

图1为pcDNA3.1质粒的图谱。

图2为胶体金试纸的结构示意图。

图3为登革热病毒抗原快速检测试纸的结果判断标准。

具体实施方式

以下实施例以举例的方式描述本方明，其不应视为对本发明的限制。所使用的实验材料如无特别说明，均为市售购买。

实施例1真核抗原的制备